| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·手性化合物简介 | 第10-11页 |
| ·手性醇的用途 | 第11页 |
| ·手性醇的制备方法 | 第11-14页 |
| ·化学法 | 第11-13页 |
| ·生物催化法 | 第13-14页 |
| ·生物法动力学拆分 | 第13-14页 |
| ·生物法不对称还原 | 第14页 |
| ·生物法不对称合成手性醇的研究现状 | 第14-20页 |
| ·生物法不对称还原的机理 | 第14-15页 |
| ·辅酶再生 | 第15-16页 |
| ·羰基还原酶的来源及发现 | 第16-18页 |
| ·生物催化反应工程 | 第18页 |
| ·酶法不对称还原在手性药物合成中的应用实例 | 第18-20页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第20页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第20-22页 |
| 第2章 羰基还原酶的基因挖掘 | 第22-36页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·基因挖掘策略 | 第22页 |
| ·材料与方法 | 第22-29页 |
| ·常用试剂和仪器 | 第22-23页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·分析方法 | 第24-25页 |
| ·酶活测定 | 第24页 |
| ·蛋白含量测定 | 第24页 |
| ·气相色谱(GC)检测法 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-29页 |
| ·羰基还原酶的基因挖掘 | 第25页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| ·PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·重组羰基还原酶的诱导表达 | 第28-29页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第29页 |
| ·羰基还原酶对COBE的不对称还原 | 第29页 |
| ·结果和讨论 | 第29-35页 |
| ·羰基还原酶的基因挖掘 | 第29-30页 |
| ·羰基还原酶的克隆表达 | 第30-33页 |
| ·羰基还原酶的功能筛选 | 第33-35页 |
| ·三种羰基还原酶的底物谱比较 | 第33页 |
| ·三种羰基还原酶对COBE的不对称还原 | 第33-35页 |
| ·本章小结 | 第35-36页 |
| 第3章 链霉菌羰基还原酶的酶学性质研究 | 第36-46页 |
| ·引言 | 第36页 |
| ·材料与方法 | 第36-38页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第36页 |
| ·分析方法 | 第36页 |
| ·重组大肠杆菌发酵培养及产酶 | 第36页 |
| ·重组羰基还原酶ScCR1的纯化 | 第36-37页 |
| ·羰基还原酶ScCR1的酶学性质研究 | 第37-38页 |
| ·酶的最适反应pH | 第37页 |
| ·酶的最适反应温度 | 第37页 |
| ·酶的热稳定性 | 第37页 |
| ·金属离子和EDTA对酶活的影响 | 第37页 |
| ·有机溶剂对酶活的影响 | 第37页 |
| ·酶的动力学参数测定 | 第37-38页 |
| ·酶的底物特异性 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-45页 |
| ·重组羰基还原酶ScCR1的纯化 | 第38页 |
| ·酶的最适反应pH | 第38-39页 |
| ·酶的最适反应温度 | 第39-40页 |
| ·酶的热稳定性 | 第40-41页 |
| ·金属离子和EDTA对酶活力的影响 | 第41-42页 |
| ·有机溶剂耐受性 | 第42页 |
| ·酶的动力学参数测定 | 第42-44页 |
| ·酶的底物特异性 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第4章 利用羰基还原酶催化合成手性醇的研究 | 第46-57页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·材料与方法 | 第46-49页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第46页 |
| ·分析方法 | 第46-48页 |
| ·ScCR1酶不对称合成手性醇的底物谱 | 第48页 |
| ·ScCR1细胞催化合成(S)-CHBE的反应体系优化 | 第48-49页 |
| ·两相体系的选择 | 第48页 |
| ·细胞量的优化 | 第48页 |
| ·NAD~+浓度的优化 | 第48-49页 |
| ·异丙醇浓度的优化 | 第49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-56页 |
| ·酶ScCR1不对称合成手性醇的底物谱 | 第49-51页 |
| ·ScCR1细胞催化合成(S)-CHBE的反应体系优化 | 第51-54页 |
| ·两相体系的选择 | 第51-52页 |
| ·细胞量的优化 | 第52-53页 |
| ·外加辅酶NAD~+浓度的优化 | 第53-54页 |
| ·异丙醇浓度的优化 | 第54页 |
| ·ScCR1整细胞催化制备(S)-CHBE | 第54-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 结论和展望 | 第57-59页 |
| 一、主要结论 | 第57页 |
| 二、论文创新点 | 第57-58页 |
| 三、今后工作展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 硕士在读期间撰写的论文和专利 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |