| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-25页 |
| ·D-氨基酸氧化酶(DAAO) | 第15-17页 |
| ·头孢菌素类抗生素概述 | 第15-16页 |
| ·两步酶法合成7-ACA | 第16页 |
| ·D-氨基酸氧化酶(DAAO) | 第16-17页 |
| ·国内外酶固定化方法发展的现状 | 第17-18页 |
| ·目前国内外固定化酶方法 | 第17-18页 |
| ·固定化酶方法存在的问题及发展方向 | 第18页 |
| ·固定化金属螯合层析(IMAC) | 第18-22页 |
| ·固定化金属亲和载体与蛋白质结合原理 | 第19-20页 |
| ·金属螯合载体的构成 | 第20-21页 |
| ·IMAC的优缺点 | 第21页 |
| ·标签结构的选择 | 第21-22页 |
| ·课题的提出及主要研究内容 | 第22-25页 |
| ·课题的提出 | 第22-23页 |
| ·本课题研究的关键问题 | 第23-25页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第25-31页 |
| ·本章引论 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·菌种和质粒 | 第25-26页 |
| ·仪器、试剂盒、工具酶、化学试剂 | 第26页 |
| ·PCR引物 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·缓冲溶液 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-31页 |
| ·分子生物学与生物化学操作方法 | 第27页 |
| ·金属离子检测 | 第27-29页 |
| ·DAAO酶活测定方法 | 第29-31页 |
| 第三章 JM105/pGEMKT-R-DAAO-Lab的构建与验证 | 第31-41页 |
| ·本章引论 | 第31页 |
| ·pGEMKT-R-DAAO-Lab表达载体的构建 | 第31-40页 |
| ·构建思路 | 第32-33页 |
| ·D-Lab273片段的PCR扩增 | 第33-35页 |
| ·双酶切体系 | 第35-36页 |
| ·连接与转化 | 第36页 |
| ·转化子的验证 | 第36页 |
| ·T-A连接 | 第36-40页 |
| ·JM105/pGEMKT-R-DAAO-Lab重组菌的构建和验证 | 第40页 |
| ·JM105/pGEMKT-R-DAAO-Lab重组菌的构建 | 第40页 |
| ·重组菌的酶活验证 | 第40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 载体性能研究及活化 | 第41-45页 |
| ·本章引论 | 第41页 |
| ·载体物化性能 | 第41-43页 |
| ·TVE载体比表面积分析 | 第41-42页 |
| ·载体含水量的测定 | 第42页 |
| ·载体上环氧基团的测定 | 第42-43页 |
| ·固定化载体制备方法 | 第43-44页 |
| ·螯合剂亚氨基二乙酸(IDA)量的确定 | 第43页 |
| ·载体制备方法 | 第43-44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 第五章 固定化酶制备及性能评价 | 第45-63页 |
| ·本章引论 | 第45页 |
| ·粗酶液的制备 | 第45-46页 |
| ·发酵罐发酵的培养基和发酵条件 | 第45页 |
| ·发酵液的处理和保存 | 第45-46页 |
| ·固定化用粗酶液的制备 | 第46页 |
| ·固定化酶制备方法、设备 | 第46-48页 |
| ·固定化酶实验室制备方法 | 第46-47页 |
| ·固定化酶实验室制备设备 | 第47-48页 |
| ·纯化效果 | 第48-49页 |
| ·固定化酶与游离酶稳定性 | 第49-52页 |
| ·4℃存储稳定性 | 第49-50页 |
| ·温度稳定性 | 第50-51页 |
| ·pH稳定性 | 第51-52页 |
| ·固定化酶与游离酶催化性能 | 第52-59页 |
| ·催化条件的确定 | 第52页 |
| ·固定化酶的最适催化温度 | 第52-53页 |
| ·固定化酶的最适催化pH | 第53-54页 |
| ·催化批次 | 第54-57页 |
| ·催化过程曲线 | 第57-59页 |
| ·载体重复利用 | 第59-61页 |
| ·本章小结 | 第61-63页 |
| 第六章 结论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 附录 | 第69-83页 |
| 附录1 实验仪器 | 第69-70页 |
| 附录2 分子生物学与生物化学操作方法 | 第70-78页 |
| 附录2-1 试剂盒法小量制备质粒DNA | 第70-71页 |
| 附录2-2 试剂盒法纯化PCR产物 | 第71-73页 |
| 附录2-3 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第73-74页 |
| 附录2-4 E.coli感受态细胞的制备及质粒转化 | 第74-75页 |
| 附录2-5 丙烯酰胺凝胶电泳 | 第75-76页 |
| 附录2-6 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第76-78页 |
| 附录3 20种标准氨基酸的英文简写 | 第78-79页 |
| 附录4 大肠杆菌中氨基酸编码偏好 | 第79-81页 |
| 附录5 溴化氢一冰乙酸非水滴定法 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第85-87页 |
| 作者和导师简介 | 第87-88页 |
| 附件 | 第88-89页 |
