| 英文缩略表 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-34页 |
| ·RNA 沉默 | 第14-24页 |
| ·RNA 沉默的发现 | 第14-15页 |
| ·RNA 沉默的分子机制 | 第15-18页 |
| ·siRNA 途径 | 第15-17页 |
| ·miRNA 途径 | 第17-18页 |
| ·RNA 沉默的特点 | 第18-19页 |
| ·RNA 沉默的应用前景 | 第19-24页 |
| ·RNA 沉默技术在植物抗病毒研究中的应用 | 第19-21页 |
| ·RNA 沉默是植物功能基因分析的一个潜在技术途径 | 第21-22页 |
| ·基因治疗 | 第22-23页 |
| ·基因敲除 | 第23页 |
| ·研究信号传导通路的新途径 | 第23页 |
| ·基因表达调控 | 第23-24页 |
| ·病毒介导的RNA 沉默 | 第24-26页 |
| ·传递性RNA 沉默 | 第26-28页 |
| ·马铃薯X 病毒基因组结构与功能 | 第28-31页 |
| ·病毒基因组的结构与功能 | 第28-30页 |
| ·病毒的复制、表达及其调控 | 第30-31页 |
| ·病毒的系统侵染 | 第31页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第31-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-55页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·病毒毒源 | 第34页 |
| ·供试植物 | 第34页 |
| ·菌株和载体 | 第34页 |
| ·生化试剂 | 第34-35页 |
| ·主要实验仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-55页 |
| ·植物表达载体pRIR202 的扩繁 | 第35-37页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·植物表达载体pRIR202 质粒转化大肠杆菌 | 第36页 |
| ·碱裂解法大量提取质粒（参照《分子克隆》第三版） | 第36-37页 |
| ·植物表达载体pRIR202XCP 的构建 | 第37-42页 |
| ·引物设计 | 第37-38页 |
| ·目的片段XCP 的PCR 扩增（聚合酶链式反应） | 第38页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第38-39页 |
| ·PCR 产物XCP 单酶切与产物回收 | 第39页 |
| ·反向重复载体pRIR202 的酶切与回收 | 第39-40页 |
| ·pRIR202 载体酶切回收产物的脱磷处理 | 第40页 |
| ·植物表达载体pRIR202XCP 的构建策略 | 第40-42页 |
| ·PVX 目的基因P2kII 片段的获得 | 第42-46页 |
| ·植物总RNA 的提取（Trizol 法） | 第42页 |
| ·引物设计 | 第42-43页 |
| ·反转录cDNA 第一链的合成 | 第43页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR 扩增） | 第43-44页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳与PCR 产物回收 | 第44页 |
| ·连接反应 | 第44页 |
| ·碱裂解法提取质粒DNA（参照《分子克隆》第三版） | 第44-45页 |
| ·重组质粒pMD18-T-P2kI 鉴定 | 第45页 |
| ·重组克隆质粒pMDP2kII 获得 | 第45-46页 |
| ·植物表达载体pRIR202-P2kII 的构建策略 | 第46-48页 |
| ·植物表达载体pRIR202XCP 与pRIR202-P2kII 向农杆菌中的转化 | 第48页 |
| ·基因转化、植株再生及T0 代转基因植株的筛选 | 第48-55页 |
| ·目的基因向烟草中的转化及植株再生 | 第48-49页 |
| ·T0 代转基因植株的抗病性鉴定及ELISA 检测 | 第49-50页 |
| ·T0 代转基因植株的总DNA 提取、PCR 鉴定 | 第50页 |
| ·T0 代转基因植株的Southern blot 分析 | 第50-53页 |
| ·T0 代转基因植株总RNA 提取及Northern blot 分析 | 第53-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-71页 |
| ·植物表达载体pRIR202XCP 的鉴定 | 第55-57页 |
| ·PVX CP 基因的PCR 扩增结果及植物表达载体pRIR202XCP 的鉴定结果 | 第55-57页 |
| ·植物表达载体pRIR202XCP 转化农杆菌的鉴定 | 第57页 |
| ·植物表达载体pRIR202-P2kII 的鉴定 | 第57-63页 |
| ·PVX 的P2KII 目的片段的获得 | 第57-59页 |
| ·RT-PCR 扩增结果 | 第57-58页 |
| ·P2KII 目的片段及重组克隆质粒pMDP2KII 的获得 | 第58-59页 |
| ·重组克隆质粒pMDP2kII 的鉴定 | 第59-60页 |
| ·重组质粒的电泳 | 第59页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第59-60页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第60页 |
| ·植物表达载体pRIR202-P2kII 的构建 | 第60-63页 |
| ·重组植物表达载体pRIR202-P2kII 的PCR 鉴定 | 第61页 |
| ·重组植物表达载体pRIR202-P2kII 的酶切鉴定 | 第61-62页 |
| ·重组植物表达载体pRIR202-P2kII 转化农杆菌的PCR 筛选 | 第62-63页 |
| ·农杆菌介导的基因转化、植株再生及T0 代转基因植株的筛选 | 第63-65页 |
| ·T0 代转基因烟草的抗病性分析 | 第65-67页 |
| ·转pRIR202XCP 的T0 代烟草的抗病性分析 | 第65-66页 |
| ·转pRIR202-P2kII 的T0 代烟草的抗病性分析 | 第66-67页 |
| ·转pRIR202-P2kII 基因植株的PCR 检测 | 第67-68页 |
| ·转基因植物的Southern blot 分析 | 第68-69页 |
| ·转pRIR202XCP 基因植物的Southern blot 分析 | 第68-69页 |
| ·转基因植物的Northern blot 分析 | 第69-71页 |
| ·转pRIR202XCP 基因植物的Northern blot 分析 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-74页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第71页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第71页 |
| ·RNA 沉默与转基因植株的抗病性 | 第71-73页 |
| ·利用反向重复结构侧翼序列转化的研究意义 | 第73-74页 |
| 5 结论 | 第74-75页 |
| ·构建反向重复结构侧翼序列植物表达载体 | 第74页 |
| ·抗病毒转基因烟草的获得及抗病性鉴定 | 第74-75页 |
| 6 参考文献 | 第75-86页 |
| 附录 I 常用缓冲液及培养基的配制 | 第86-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 硕士期间发表的学术论文 | 第91-92页 |
| 硕士学位论文内容简介及自评 | 第92页 |
