| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 综述-微藻在生物柴油及 PUFAs 生产方面的应用 | 第13-35页 |
| 1 微藻与生物柴油 | 第13-25页 |
| ·生物柴油 | 第13-16页 |
| ·生物柴油简介 | 第13-14页 |
| ·生物柴油用途及优缺点 | 第14-16页 |
| ·生物柴油研究现状及发展前景 | 第16页 |
| ·微藻生物柴油 | 第16-20页 |
| ·微藻作为生物柴油的独特优势 | 第16-18页 |
| ·可用来开发生物柴油的微藻 | 第18-20页 |
| ·油脂富集的机制及代谢调控 | 第20-22页 |
| ·油脂合成路径 | 第20页 |
| ·基因工程手段在油脂富集方面的应用 | 第20-22页 |
| ·长链酰基辅酶A 合成酶(LACS) | 第22-25页 |
| 2 微藻与 PUFAs | 第25-35页 |
| ·PUFAs 的命名、生理功能及来源 | 第25-28页 |
| ·PUFAs 的生物合成途径 | 第28-30页 |
| ·脂肪酸去饱和酶和脂肪酸延伸酶 | 第30-35页 |
| 第二章 微拟球藻的分离纯化鉴定 | 第35-47页 |
| 1 前言 | 第35-36页 |
| 2 微拟球藻的分类地位及形态特征 | 第36页 |
| ·分类地位 | 第36页 |
| ·形态特征 | 第36页 |
| 3 藻种来源及培养 | 第36-37页 |
| ·藻种来源 | 第36-37页 |
| ·藻种培养 | 第37页 |
| ·试剂与仪器 | 第37页 |
| ·培养方法 | 第37页 |
| 4 藻种分离纯化与鉴定 | 第37-41页 |
| ·试剂与仪器 | 第38页 |
| ·藻种的分离纯化 | 第38-39页 |
| ·藻种鉴定 | 第39-40页 |
| ·微拟球藻基因组DNA 的制备 | 第39-40页 |
| ·PCR 反应体系及反应条件 | 第40页 |
| ·结果及分析 | 第40-41页 |
| 5 微拟球藻抗生素抗性分析 | 第41-47页 |
| ·材料与仪器 | 第41页 |
| ·方法流程 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-47页 |
| ·液体培养基中微拟球藻对五种抗生素的敏感性 | 第42-44页 |
| ·固体培养时微拟球藻抗生素敏感性 | 第44-47页 |
| 第三章 微拟球藻脂酰辅酶 A 合成酶基因的克隆及功能验证 | 第47-73页 |
| 1 脂酰辅酶 A 合成酶基因的克隆及生物信息学分析 | 第47-61页 |
| ·微拟球藻RNA 的提取 | 第47-49页 |
| ·材料与仪器 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-49页 |
| ·脂酰辅酶A 合成酶基因5’端序列的获得 | 第49-54页 |
| ·材料与仪器 | 第49页 |
| ·方法流程 | 第49-54页 |
| ·脂酰辅酶A 合成酶基因全长的获得 | 第54-56页 |
| ·材料和仪器 | 第54页 |
| ·设计特异引物获得脂酰辅酶A 合成酶基因全长 | 第54-56页 |
| ·脂酰辅酶A 合成酶基因的生物信息学分析 | 第56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-61页 |
| ·RNA 提取的结果 | 第56页 |
| ·5’RACE 的结果 | 第56-57页 |
| ·脂酰辅酶A 合成酶基因全长的获得及生物信息学分析 | 第57-61页 |
| 2 重组质粒pYES2-NOLACS 的构建 | 第61-63页 |
| ·材料和试剂 | 第61页 |
| ·方法流程 | 第61-63页 |
| ·结果及讨论 | 第63页 |
| 3 酵母互补实验对 NOLACS 进行功能鉴定 | 第63-73页 |
| ·材料与仪器 | 第63-64页 |
| ·酵母培养用的几种关键培养基 | 第64页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第64-65页 |
| ·空质粒及重组质粒转化缺陷型酵母YB525 | 第65页 |
| ·酵母互补实验对NOLACS 进行功能鉴定 | 第65-66页 |
| ·NOLACS 的底物偏好性分析 | 第66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-73页 |
| ·对NOLACS 进行功能鉴定 | 第66-68页 |
| ·NOLACS 的底物偏好性分析 | 第68-73页 |
| 第四章 氮限制对微拟球藻 NOLACS 基因转录水平及总脂含量的影响 | 第73-80页 |
| 1 限氮对微拟球藻总脂含量的影响 | 第73-74页 |
| ·材料与仪器 | 第73页 |
| ·培养基及培养条件 | 第73页 |
| ·方法流程 | 第73-74页 |
| 2 限氮对 NOLACS 基因转录水平的影响 | 第74-76页 |
| ·材料与仪器 | 第74-75页 |
| ·方法流程 | 第75-76页 |
| 3 结果及分析 | 第76-80页 |
| 第五章 微拟球藻延伸酶的克隆及功能分析 | 第80-93页 |
| 1 设计特异引物获得延伸酶3’端序列 | 第80-82页 |
| ·材料与仪器 | 第80页 |
| ·3’ RACE 流程 | 第80-82页 |
| 2 微拟球藻延伸酶的cDNA 全长序列的获得 | 第82-86页 |
| ·材料与仪器 | 第82页 |
| ·方法流程 | 第82-83页 |
| ·结果与讨论 | 第83-86页 |
| 3 构建重组表达载体 | 第86-88页 |
| ·材料和试剂 | 第86页 |
| ·方法流程 | 第86-88页 |
| ·结果及讨论 | 第88页 |
| 4 微拟球藻延伸酶在真核表达系统中的功能验证 | 第88-93页 |
| ·材料与仪器 | 第88-89页 |
| ·酿酒酵母感受态细胞的制备及转化 | 第89-90页 |
| ·酵母菌株的诱导表达 | 第90页 |
| ·脂肪酸提取及分析 | 第90-91页 |
| ·脂肪酸提取及甲酯化 | 第90页 |
| ·脂肪酸的气相色谱(GC)分析 | 第90-91页 |
| ·结果与分析 | 第91-93页 |
| 总结和展望 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-109页 |
| 附录1 常见的脂肪酸 | 第109-110页 |
| 附录2 EPA 和 DHA 的重要生理功能* | 第110-111页 |
| 个人简历 | 第111页 |
| 发表的学术论文 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
