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荧光定量PCR检测DPV弱毒免疫鸭消化道和呼吸道大肠杆菌、葡萄球菌、乳酸杆菌及其数量变化规律的研究

论文独创性声明第1页
关于论文使用授权的声明第2-5页
中文摘要第5-7页
ABSTRACT第7-9页
前言第9-24页
1 材料与方法第24-34页
   ·材料第24-28页
     ·实验动物第24页
     ·疫苗及参考菌株第24页
     ·实验仪器及试剂第24-25页
     ·实验试剂的配制第25-26页
     ·引物与探针第26-28页
   ·方法第28-34页
     ·动物免疫分组设计第28页
     ·采样设计第28页
     ·样品处理及粪便中菌群总DNA的提取第28-29页
     ·标准菌株的培养第29-30页
     ·标准菌株基因组的提取第30页
     ·引物与探针的设计第30-31页
     ·标准品的制备及鉴定第31-32页
     ·实时荧光定量 PCR条件的建立第32页
     ·实时荧光定量 PCR标准曲线的建立及线性范围的确定第32页
     ·实时荧光定量 PCR探针特异性和敏感性的确定第32-33页
     ·样品的检测分析第33-34页
2 结果第34-72页
   ·常规 PCR产物及测序结果第34-37页
     ·大肠杆菌属常规 PCR产物及测序结果第34-35页
     ·葡萄球菌属常规 PCR产物及测序结果第35-36页
     ·乳酸杆菌属常规 PCR产物及测序结果第36-37页
   ·实时荧光定量 PCR条件的优化第37-40页
     ·大肠杆菌属 FQ-PCR条件的优化第37-38页
     ·葡萄球菌属 FQ-PCR条件的优化第38-39页
     ·乳酸杆菌属 FQ-PCR条件的优化第39-40页
   ·实时荧光定量 PCR检测的特异性第40-42页
     ·大肠杆菌属 FQ-PCR探针特异性第40-41页
     ·葡萄球菌属 FQ-PCR探针特异性第41页
     ·乳酸杆菌属 FQ-PCR探针特异性第41-42页
   ·实时荧光定量 PCR检测的灵敏性分析第42-44页
     ·大肠杆菌属 FQ-PCR检测的灵敏性第42-43页
     ·葡萄球菌属 FQ-PCR检测的灵敏性第43页
     ·乳酸杆菌属 FQ-PCR检测的灵敏性第43-44页
   ·实时荧光定量 PCR标准曲线的建立及线性范围分析第44-50页
     ·大肠杆菌属 FQ-PCR标准曲线及其线性范围第44-46页
     ·葡萄球菌属 FQ-PCR标准曲线及其线性范围第46-48页
     ·乳酸杆菌属 FQ-PCR标准曲线及其线性范围第48-50页
   ·实时荧光定量 PCR对鸭消化道和呼吸道内菌群的定量第50-72页
     ·FQ-PCR对鸭消化道和呼吸道内大肠杆菌属菌群的定量第50-57页
     ·FQ-PCR对鸭消化道和呼吸道内葡萄球菌属菌群的定量第57-64页
     ·FQ-PCR对鸭消化道和呼吸道内乳酸杆菌属菌群的定量第64-72页
3 讨论第72-86页
   ·实时荧光定量 PCR技术第72-73页
   ·实时荧光定量 PCR引物与探针第73-74页
   ·实时荧光定量 PCR标准曲线第74页
   ·镁离子与探针浓度优化第74-75页
   ·粪便样品中菌群总 DNA的提取第75页
   ·樱桃谷鸭消化道和呼吸道内菌群检测第75-86页
     ·对照组樱桃谷鸭消化道和呼吸道内菌群第75-78页
     ·口服 DPV弱毒组樱桃谷鸭消化道和呼吸道内菌群第78-81页
     ·滴鼻 DPV弱毒组樱桃谷鸭消化道和呼吸道内菌群第81-82页
     ·皮下注射 DPV弱毒组樱桃谷鸭消化道和呼吸道内菌群第82-83页
     ·口服同居组樱桃谷鸭消化道和呼吸道内菌群第83页
     ·滴鼻同居组樱桃谷鸭消化道和呼吸道内菌群第83-84页
     ·皮下同居组樱桃谷鸭消化道和呼吸道内菌群第84-86页
4 结论第86-87页
   ·实时荧光定量 PCR方法建立第86页
   ·DPV弱毒口服免疫鸭及其同居鸭消化道和呼吸道内菌群变化第86页
   ·DPV弱毒滴鼻免疫鸭及其同居鸭消化道和呼吸道内菌群变化第86页
   ·DPV弱毒皮下注射免疫鸭及其同居鸭消化道和呼吸道内菌群变化第86-87页
参考文献第87-94页
致谢第94-95页
攻读学位期间发表的学术论文目录第95页

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