| 中文摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-37页 |
| 第一章 GM-CSF的研究进展 | 第13-25页 |
| 1.GM-CSF的染色体定位和基因组结构 | 第14-15页 |
| 2.GM-CSF基因的表达调控 | 第15-16页 |
| 3.GM-CSF的结构与功能 | 第16页 |
| 4.GM-CSF的生物学活性 | 第16-17页 |
| 5.GM-CSF在一些疾病的作用 | 第17-25页 |
| ·GM-CSF在转基因动物疾病模型的作用 | 第17页 |
| ·GM-CSF在肺泡蛋白沉积症中的作用 | 第17-18页 |
| ·GM-CSF引起的炎症反应 | 第18页 |
| ·GM-CSF佐剂的作用 | 第18页 |
| ·宿主防御感染 | 第18-25页 |
| 第二章 昆虫杆状病毒表达载体系统研究进展 | 第25-37页 |
| 1.杆状病毒的生活循环 | 第26页 |
| 2.杆状病毒的基因及其功能 | 第26-28页 |
| ·编码多角体有关的蛋白质的基因 | 第26-27页 |
| ·编码病毒体结构蛋白基因 | 第27-28页 |
| ·编码BV和PDV共有的结构蛋白的基因 | 第27页 |
| ·BV特有的结构蛋白基因 | 第27页 |
| ·PDV特有的结构蛋白基因 | 第27-28页 |
| 3.杆状病毒表达系统的建立及其原理 | 第28页 |
| 4.杆状病毒载体表达系统的改进 | 第28-31页 |
| ·重组病毒分离和定量的改进 | 第28-30页 |
| ·杆状病毒转移载体的改进 | 第30-31页 |
| 5.杆状病毒载体表达系统的特点 | 第31-33页 |
| ·杆状病毒表达系统的优点 | 第32页 |
| ·家蚕／BMNPV系统相对于SF细胞／AcNPV系统的优势 | 第32-33页 |
| ·杆状病毒表达系统存在的缺陷 | 第33页 |
| 6.BESV的表达水平及其影响因素 | 第33-37页 |
| 第二部分 研究报告 | 第37-96页 |
| 第一章 实验设计方案 | 第38-41页 |
| 1.本研究的目的和意义 | 第38-39页 |
| 2.本研究的主要内容 | 第39-40页 |
| 3.实验流程 | 第40-41页 |
| 第二章 人GM-CSF在家蚕蛹中的表达、纯化和理化性质分析 | 第41-96页 |
| 1 材料和方法 | 第41-70页 |
| ·材料 | 第41-48页 |
| ·细胞、菌种、病毒和载体 | 第41页 |
| ·工具酶、试剂盒和其它生化试剂 | 第41-48页 |
| ·方法 | 第48-70页 |
| ·人GM-CSF基因的克隆 | 第48-50页 |
| ·重组转移载体PBM-CSF的构建 | 第50-54页 |
| ·重组病毒的构建与筛选 | 第54-62页 |
| ·人GM-CSF在家蚕蛹中的表达和鉴定 | 第62-65页 |
| ·家蚕蛹表达的RHGM-CSF大量纯化(所有操作在4℃条件下进行) | 第65-70页 |
| 2 结果 | 第70-88页 |
| ·HGM-CSF基因的克隆 | 第70-72页 |
| ·总RNA的提取 | 第70-71页 |
| ·HGM-CSF基因的克隆 | 第71-72页 |
| ·重组转移载体的构建 | 第72-74页 |
| ·转移载体PUBM-4的图谱 | 第72页 |
| ·重组转移载体PBM-CSF的构建 | 第72-73页 |
| ·重组转移载体PBM-CSF的鉴定 | 第73页 |
| ·HGM-CSF基因序列分析 | 第73-74页 |
| ·重组病毒的构建和筛选 | 第74-78页 |
| ·病毒BM-BACPAK6 DNA的线性化 | 第74-75页 |
| ·共转染及重组病毒的筛选 | 第75页 |
| ·重组病毒的鉴定 | 第75-78页 |
| ·重组病毒的滴度测定 | 第77-78页 |
| ·人GM-CSF在蚕蛹中的表达和体外活性分析 | 第78-81页 |
| ·HGM-CSF标准曲线绘制 | 第78页 |
| ·RHGM-CSF在家蚕细胞中的表达与重组病毒滴度的关系 | 第78-79页 |
| ·RHGM-CSF在家蚕蛹体内的表达时相 | 第79-80页 |
| ·家蚕蛹表达的RHGM-CSF生物学活性的测定 | 第80页 |
| ·RHGM-CSF的SDS-PAGE和WESTERN BLOTTING检测 | 第80-81页 |
| ·蚕蛹表达人GM-CSF的纯化、理化性质和体外活性分析 | 第81-88页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第81页 |
| ·分子筛过滤 | 第81-82页 |
| ·HIPREP Q FF柱层析 | 第82页 |
| ·MONO Q柱层析 | 第82页 |
| ·纯化样品的SDS-PAGE和WESTERN BLOTTING分析 | 第82-83页 |
| ·纯化样品的纯度分析 | 第83页 |
| ·家蚕表达的BM-RHGM-CSF纯化 | 第83-84页 |
| ·BM-RHGM-CSF生物活性检测 | 第84页 |
| ·BM-RHGM-CSF理化性质的分析 | 第84-88页 |
| 3 讨论 | 第88-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 攻读博士学位期间的研究成果及发表的学术论文 | 第97页 |
