摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-11页 |
第一章 文献综述 | 第11-34页 |
·高温胁迫 | 第11-18页 |
·高温胁迫对植物的影响 | 第11-12页 |
·高温与氧化胁迫 | 第12-13页 |
·植物耐热机制 | 第13-17页 |
·种子耐热性研究 | 第17-18页 |
·种子活力相关研究 | 第18-21页 |
·种子活力概述 | 第18-19页 |
·种子老化概述 | 第19-21页 |
·种子活力测定 | 第21页 |
·莲种子研究概述 | 第21-22页 |
·植物膜联蛋白(annexin)研究进展 | 第22-30页 |
·植物annexin 的结构 | 第23-24页 |
·植物annexin 的定位 | 第24-26页 |
·植物annexin 的表达 | 第26-27页 |
·植物annexin 的生物学活性及功能 | 第27-30页 |
·本研究的目的意义 | 第30-32页 |
·研究内容及技术路线 | 第32-34页 |
·莲胚轴耐热相关蛋白的蛋白质组学鉴定 | 第32页 |
·莲annexin 在高温胁迫和种子活力中的功能研究 | 第32-34页 |
第二章 莲膜联蛋白(NnANN1)的蛋白质鉴定和纯化 | 第34-71页 |
·材料和试剂 | 第34-39页 |
·实验材料 | 第34页 |
·实验试剂、药品及消耗品 | 第34-35页 |
·溶液及试剂配制 | 第35-38页 |
·PCR 引物合成及测序 | 第38页 |
·生物信息学分析 | 第38-39页 |
·实验设备 | 第39页 |
·实验方法 | 第39-51页 |
·莲种子的高温处理 | 第39-40页 |
·TTC 鉴定种子活力 | 第40页 |
·蛋白质提取及定量 | 第40-41页 |
·SDS-PAGE 蛋白质电泳 | 第41-42页 |
·双向电泳 | 第42-43页 |
·蛋白质MALDI/TOF MS/MS 鉴定 | 第43-44页 |
·莲种子胚轴总RNA 提取 | 第44-45页 |
·cDNA 第一链的合成 | 第45页 |
·目的蛋白NnANN1 的基因扩增 | 第45-47页 |
·原核表达及蛋白纯化 | 第47-49页 |
·抗体的制备 | 第49页 |
·Western blot | 第49-50页 |
·数据统计及分析 | 第50-51页 |
·结果与分析 | 第51-69页 |
·莲种子耐热性鉴定 | 第51-53页 |
·比较蛋白质组学鉴定莲胚轴耐热应答蛋白 | 第53-60页 |
·莲膜联蛋白NnANN1 及其编码基因克隆 | 第60-65页 |
·莲膜联蛋白NnANN1 的表达纯化 | 第65-69页 |
·讨论 | 第69-71页 |
第三章 莲种子NnANN1 在提高种子耐热性和活力中的功能分析 | 第71-105页 |
·材料和试剂 | 第71-73页 |
·实验材料 | 第71页 |
·实验试剂,药品及消耗品 | 第71-72页 |
·溶液及试剂配制 | 第72-73页 |
·实验设备 | 第73-74页 |
·实验方法 | 第74-82页 |
·RNA 提取及逆转录合成cDNA | 第74页 |
·qRT-PCR 反应 | 第74-75页 |
·蛋白质提取及定量 | 第75页 |
·Western blot | 第75页 |
·亚细胞定位 | 第75-76页 |
·重组菌耐热性鉴定 | 第76页 |
·拟南芥转化 | 第76-82页 |
·其他实验方法 | 第82页 |
·结果与分析 | 第82-102页 |
·RNA 提取 | 第82-83页 |
·高温处理后NnANN1 表达模式 | 第83-85页 |
·NnANN1 的表达模式及亚细胞定位 | 第85-87页 |
·NnANN1 转化提高重组菌耐热性 | 第87-90页 |
·NnANN1 提高转基因拟南芥种子耐热性和活力 | 第90-99页 |
·拟南芥突变株 ann1 和 ann2 种子耐热性及活力 | 第99-102页 |
·讨论 | 第102-105页 |
第四章 论文总结与展望 | 第105-106页 |
·总结 | 第105页 |
·展望及有待进一步研究的问题 | 第105-106页 |
参考文献 | 第106-127页 |
附录 | 第127-130页 |
附录1:缩略词表 | 第127-129页 |
附录2:攻读博士学位期间发表论文(含待发表) | 第129-130页 |
致谢 | 第130页 |