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犬瘟热病毒N蛋白体外表达与诊断技术应用研究

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-15页
前言第15-16页
文献综述第16-37页
 1 地理分布与危害第16页
 2 犬瘟热病原学第16-23页
 3 犬瘟热流行病学第23-28页
 4 临床症状第28-29页
 5 致病机理及病理变化第29-30页
 6 诊断技术第30-35页
 7 免疫与防治第35-37页
实验一 狐源犬瘟热病毒的分离与鉴定第37-48页
 1 引言第37页
 2 材料与方法第37-42页
   ·材料第37-39页
   ·方法第39-42页
 3 结果第42-46页
   ·病毒分离结果第42-43页
   ·电镜观察结果第43-44页
   ·病毒滴度测定试验结果第44页
   ·病毒的理化特性试验结果第44-45页
   ·动物回归试验结果第45页
   ·RT-PCR扩增结果第45页
   ·荧光定量RT-PCR结果第45-46页
 4 讨论第46-47页
 5 小结第47-48页
实验二 狐源犬瘟热病毒N基因的克隆与序列分析第48-58页
 1 引言第48页
 2 材料与方法第48-54页
   ·材料第48-50页
   ·方法第50-54页
 3 结果第54-56页
   ·CDV-FOX-TA N基因的RT-PCR扩增产物第54页
   ·重组质粒pCDV/TA-N酶切鉴定第54-55页
   ·CDV-FOX-TA N基因的同源性分析第55页
   ·CDV-FOX-TA N基因系统发生分析第55-56页
 4 讨论第56-57页
 5 小结第57-58页
试验三 犬瘟热病毒N基因的真核表达与鉴定第58-66页
 1 引言第58页
 2 材料与方法第58-62页
   ·材料第58-59页
   ·方法第59-62页
 3 结果第62-64页
   ·CDV N基因的扩增、克隆和重组质粒pIRES-N的鉴定第62页
   ·潮霉素浓度定量第62-63页
   ·重组质粒转染CHO-K1细胞及阳性克隆的筛选第63页
   ·转染细胞株表达产物的鉴定第63-64页
 4 讨论第64-65页
 5 小结第65-66页
试验四 狐源犬瘟热病毒N基因的原核表达及鉴定第66-81页
 1 引言第66页
 2 材料与方法第66-74页
   ·材料第66-67页
   ·方法第67-74页
 3 结果第74-79页
   ·CDV-N基因的扩增结果第74-75页
   ·CDV-N基因测序结果及分析第75-76页
   ·重组表达质粒pET24b-N的酶切鉴定第76页
   ·融合蛋白的表达和纯化第76-77页
   ·重组CDV-N蛋白的免疫原性分析第77-78页
   ·重组表达产物CDV-N蛋白的抗原性测定第78-79页
 4 讨论第79-80页
 5 小结第80-81页
试验五 检测犬瘟热病毒抗体的重组N蛋白-ELSIA方法的 建立及应用第81-93页
 1 引言第81页
 2 材料与方法第81-85页
   ·材料第81-82页
   ·方法第82-85页
 3 结果第85-91页
   ·重组N蛋白的纯化效果第85-86页
   ·重组N蛋白的特异性检查第86页
   ·重组N蛋白-ELISA方法的建立第86-89页
   ·特异性试验第89页
   ·敏感性试验第89-90页
   ·重复性试验第90页
   ·抗原包被板保存期的确定第90-91页
   ·重组N蛋白-ELISA检测方法的应用第91页
 4 讨论第91-92页
 5 小结第92-93页
试验六 TqaMan荧光定量RT-PCR检测CDV方法的 建立与初步应用第93-103页
 1 引言第93页
 2 材料与方法第93-97页
   ·材料第93-94页
   ·方法第94-97页
 3 结果第97-100页
   ·反转录反应体系及条件第97页
   ·RT-PCR反应体系与反应条件第97页
   ·Taq Man荧光定量RT-PCR反应体系及反应条件第97-98页
   ·特异性试验结果第98页
   ·敏感性试验结果第98-99页
   ·重复性试验结果及标准曲线第99-100页
   ·CDV Taq Man荧光定量RT-PCR方法的初步应用结果第100页
 4 讨论第100-101页
 5 小结第101-103页
结论第103-105页
参考文献第105-119页
缩略语表第119-121页
致谢第121-122页
作者简介第122-123页
攻读博士期间发表的学术论文及研究成果第123页

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