| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-34页 |
| ·硫杆菌概述及其研究价值 | 第14-17页 |
| ·A.ferrooxidans菌概述 | 第16-17页 |
| ·喜温硫杆菌概述 | 第17页 |
| ·硫细菌的能量代谢 | 第17-30页 |
| ·硫代谢底物多样性 | 第18-19页 |
| ·硫杆菌的能量代谢中ATP形成过程 | 第19-20页 |
| ·ATP与CO_2的固定及生长速度的关系 | 第20-21页 |
| ·参与能量代谢的酶及代谢路径的多样性 | 第21-26页 |
| ·几种硫杆菌硫代谢硫代谢模型 | 第26-30页 |
| ·课题研究背景,目的和意义 | 第30-32页 |
| ·本论文研究内容 | 第32页 |
| ·本论文课题资助情况 | 第32-34页 |
| 第2章 嗜酸硫杆菌硫代谢酶系与硫化矿微生物浸出之间的关系 | 第34-48页 |
| ·引言 | 第34-35页 |
| ·材料与方法 | 第35-36页 |
| ·试验菌种 | 第35页 |
| ·矿样 | 第35页 |
| ·浸出培养基 | 第35页 |
| ·细菌培养 | 第35-36页 |
| ·分析方法 | 第36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-47页 |
| ·不同组合细菌对闪锌矿的浸出 | 第36-38页 |
| ·高价铁,亚铁对细菌浸出闪锌矿的影响 | 第38-41页 |
| ·原始矿样及浸出残渣的分析 | 第41-45页 |
| ·微生物硫代谢与硫化矿浸出关系 | 第45-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 第3章 重金属胁迫下嗜酸硫杆菌硫代谢酶系的变化 | 第48-63页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·材料与方法 | 第48-53页 |
| ·实验菌种 | 第48页 |
| ·A.caldus细菌的培养 | 第48-49页 |
| ·A.caldus细菌生长曲线的绘制 | 第49页 |
| ·收集细菌和提取粗蛋白 | 第49-50页 |
| ·A.caldus周质蛋白,膜蛋白,胞内蛋白分离 | 第50页 |
| ·溶解氧测定 | 第50页 |
| ·A.caldus细菌中硫代谢相关酶活性的测定 | 第50-52页 |
| ·蛋白酶K和缬氨霉素对A.caldus细菌的处理 | 第52-53页 |
| ·A.caldus亚细胞结构中铜离子浓度的测定 | 第53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-62页 |
| ·五种硫代谢关键酶在A.caldus细菌中的亚细胞定位 | 第53-55页 |
| ·不同浓度的Cu~(2+)对细菌生长影响 | 第55-56页 |
| ·不同浓度的Cu~(2+)对细菌氧代谢影响 | 第56-57页 |
| ·在不同浓度的Cu~(2+)对细菌裂解液中硫代谢酶活性影响 | 第57-58页 |
| ·不同浓度的Cu~(2+)培养后细菌硫代谢酶活性变化 | 第58-59页 |
| ·Cu~(2+)在细菌的亚细胞结构中的分布 | 第59-61页 |
| ·蛋白酶K作用前后细菌硫代谢酶活性变化 | 第61-62页 |
| ·本章小结 | 第62-63页 |
| 第4章 硫化物脱氢酶基因序列分析与克隆,原核表达及酶活性研究 | 第63-85页 |
| ·引言 | 第63页 |
| ·材料与方法 | 第63-69页 |
| ·A.ferrooxidans ATCC 23270基因组提取 | 第63-64页 |
| ·目标序列的获得 | 第64-65页 |
| ·酶切PCR产物及载体pLM1 | 第65页 |
| ·载体和目的片段连接 | 第65页 |
| ·克隆载体的转化 | 第65-66页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第66页 |
| ·蛋白质表达转化 | 第66页 |
| ·蛋白质的条件表达 | 第66-67页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第67-68页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第68-69页 |
| ·结果与讨论 | 第69-84页 |
| ·硫化物脱氢酶基因的克隆策略 | 第69-70页 |
| ·硫化物脱氢酶基因序列分析 | 第70-72页 |
| ·硫化物氧化酶基因上下游基因序列分析 | 第72-73页 |
| ·不同来源的硫化物脱氢酶氨基酸序列比对 | 第73-76页 |
| ·蛋白质纯化 | 第76-77页 |
| ·UV/Vis扫描 | 第77-78页 |
| ·基于FCSD和SQR活性的硫化物氧化与电子传递途径 | 第78-79页 |
| ·基于FCSD的硫化物代谢途径与细菌生理关系和地位分析 | 第79-82页 |
| ·硫化物脱氢酶生物化学特征的研究 | 第82-84页 |
| ·本章小结 | 第84-85页 |
| 第5章 硫化物脱氢酶与硫醌还原酶特征比较 | 第85-105页 |
| ·引言 | 第85-86页 |
| ·材料与方法 | 第86-92页 |
| ·提取RNA的细菌材料准备 | 第86页 |
| ·RNA的提取 | 第86-87页 |
| ·反转录cDNA合成 | 第87-88页 |
| ·PCR引物设计及标准曲线的制作 | 第88-90页 |
| ·酶活性测定 | 第90页 |
| ·硫化物脱氢酶及其同功酶SQR基因的进化关系分析 | 第90-92页 |
| ·结果与讨论 | 第92-104页 |
| ·不同能源下,硫化物脱氢酶及其同功酶SQR基因mRNA水平表达丰度比较 | 第92-95页 |
| ·Real time Quantitative PCR | 第95-99页 |
| ·不同底物下蛋白质水平的硫化物脱氢酶及其同功酶SQR活性差异 | 第99-101页 |
| ·硫化物脱氢酶及其同功酶SQR氨基酸序列比较 | 第101页 |
| ·硫化物脱氢酶及其同功酶SQR蛋白特征比较 | 第101-102页 |
| ·硫化物脱氢酶及其同功酶SQR的进化表现 | 第102-104页 |
| ·本章小结 | 第104-105页 |
| 第6章 硫化物脱氢酶基因的定点突变 | 第105-114页 |
| ·引言 | 第105页 |
| ·材料与方法 | 第105-107页 |
| ·引物的设计 | 第105-106页 |
| ·PCR扩增 | 第106页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第106-107页 |
| ·突变蛋白质的表达及纯化 | 第107页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第107页 |
| ·紫外分光光度计(UV Scanning) | 第107页 |
| ·结果与讨论 | 第107-113页 |
| ·FCSD蛋白的结构模拟与分析 | 第107-109页 |
| ·突变序列的验证 | 第109-111页 |
| ·硫化物脱氢酶突变体的表达纯化 | 第111页 |
| ·突变型硫化物脱氢酶与其非突变型的紫外-可见光谱扫描 | 第111-113页 |
| ·本章小结 | 第113-114页 |
| 第7章 硫化物脱氢酶的电化学研究 | 第114-125页 |
| ·引言 | 第114页 |
| ·试验材料和研究方法 | 第114-116页 |
| ·工作电极的修饰处理 | 第114-115页 |
| ·电化学实验方法 | 第115-116页 |
| ·结果与讨论 | 第116-124页 |
| ·工作电极组装及电子传递机理 | 第116-118页 |
| ·修饰电极的电化学阻抗表征 | 第118-120页 |
| ·不同修饰电极的电化学行为 | 第120-121页 |
| ·修饰电极对硫化物的电催化 | 第121页 |
| ·硫化物脱氢酶/纳米金/半胱氨酸/金电极对硫化物的计时电流响应 | 第121-123页 |
| ·修饰电极稳定性和抗干扰能力 | 第123-124页 |
| ·本章小结 | 第124-125页 |
| 第8章 结论 | 第125-129页 |
| 参考文献 | 第129-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 附录 攻读博士期间发表论文及获奖情况 | 第143-145页 |
| 一 攻读博士期间发表论文 | 第143-144页 |
| 二 攻读博士期间申请专利 | 第144页 |
| 三 攻读博士期间主持或参加课题 | 第144-145页 |
