| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-22页 |
| ·猪圆环病毒病原学研究进展 | 第12-15页 |
| ·病毒的发现 | 第12-13页 |
| ·病毒的培养特性 | 第13页 |
| ·PCV基因组结构 | 第13-14页 |
| ·ORF2基因的研究进展 | 第14-15页 |
| ·PCV2诊断技术研究进展 | 第15-17页 |
| ·病原学方法 | 第15-17页 |
| ·血清学方法 | 第17页 |
| ·PCV2疫苗研究进展 | 第17-20页 |
| ·灭活疫苗 | 第17-18页 |
| ·弱毒疫苗 | 第18页 |
| ·基因工程疫苗 | 第18-20页 |
| ·猪圆环病毒单克隆抗体研究进展 | 第20页 |
| ·减毒沙门氏菌载体研究进展 | 第20-22页 |
| ·减毒沙门氏菌载体的优点 | 第20-21页 |
| ·减毒沙门氏菌载体改进 | 第21页 |
| ·沙门氏菌载体的应用 | 第21-22页 |
| 2 研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 3 材料与方法 | 第23-37页 |
| ·实验材料 | 第23-26页 |
| ·菌种、质粒 | 第23页 |
| ·细胞和试验动物 | 第23页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第23-24页 |
| ·主要培养基及试剂的配制 | 第24-26页 |
| ·实验方法 | 第26-37页 |
| ·抗原制备 | 第26-27页 |
| ·小鼠免疫 | 第27页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第27-28页 |
| ·细胞融合 | 第28-30页 |
| ·Western-blot分析 | 第30页 |
| ·间接免疫荧光 | 第30-31页 |
| ·交叉试验 | 第31页 |
| ·单克隆抗体Ig亚型的测定 | 第31页 |
| ·单克隆抗体生产 | 第31页 |
| ·单抗效价(腹水)测定 | 第31页 |
| ·杂交瘤细胞冻存和复苏 | 第31页 |
| ·单克隆抗体稳定性鉴定 | 第31-32页 |
| ·腹水中单抗的纯化 | 第32页 |
| ·质粒的小量制备 | 第32页 |
| ·PCV2-ORF2全基因和去核定位信号ORF2基因的扩增 | 第32-33页 |
| ·PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第33页 |
| ·大肠杆菌x6097感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第33页 |
| ·连接产物的转化 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第34页 |
| ·沙门氏菌电转化感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·沙门氏菌的电转化 | 第34-35页 |
| ·重组菌株的鉴定 | 第35页 |
| ·重组菌株的分泌表达 | 第35页 |
| ·重组菌株的表型鉴定 | 第35页 |
| ·重组菌株生长特性分析 | 第35页 |
| ·重组菌株的遗传稳定性 | 第35页 |
| ·重组菌株对小鼠的免疫试验 | 第35-36页 |
| ·沙门氏菌ELISA检测方法的建立 | 第36-37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-52页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第37-40页 |
| ·重组蛋白的提取 | 第37页 |
| ·间接ELISA方法的确定 | 第37页 |
| ·细胞融合后的观察 | 第37页 |
| ·阳性杂交瘤细胞筛选及克隆 | 第37-38页 |
| ·Western-blot | 第38页 |
| ·间接免疫荧光 | 第38-39页 |
| ·交叉实验 | 第39页 |
| ·单克隆抗体的效价 | 第39页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第39页 |
| ·稳定性检测 | 第39页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第39-40页 |
| ·表达猪2型圆环病毒Cap蛋白重组沙门氏菌的构建 | 第40-48页 |
| ·PCV2-ORF2全基因和去核定位信号ORF2的克隆 | 第40页 |
| ·重组质粒pYA-ORF2和pYA-△41ORF2的构建与鉴定 | 第40-42页 |
| ·重组菌株C501(pYA-ORF2)和C501(pYA-△41ORF2)的构建与鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组菌株C501(pYA-ORF2)和C501(pYA-△41ORF2)的分泌表达 | 第43-44页 |
| ·重组菌株C501(pYA-△41ORF2)的表型鉴定 | 第44页 |
| ·重组菌株C501(pYA-△41ORF2)的生长特性研究 | 第44页 |
| ·重组菌株C501(pYA-△41ORF2)的遗传稳定性 | 第44-46页 |
| ·重组菌株C501(pYA-△41ORF2)对小鼠的免疫试验 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48-52页 |
| ·动物免疫 | 第48页 |
| ·细胞融合 | 第48页 |
| ·筛选与克隆 | 第48-49页 |
| ·污染和控制 | 第49页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第49页 |
| ·NLS对表达ORF2基因的影响 | 第49-50页 |
| ·细菌载体的选择 | 第50页 |
| ·PCV2-ORF2基因在C500crp-/asd-缺失株平衡致死系统中的表达 | 第50-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
