| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第12-14页 |
| 第1章 副猪嗜血杆菌乳胶凝集抗原检测方法的建立及初步应用 | 第14-38页 |
| 1.文献综述 | 第14-20页 |
| ·副猪嗜血杆菌的病原学 | 第14页 |
| ·猪革拉氏病的流行病学及其危害 | 第14-15页 |
| ·猪革拉氏病的流行病学 | 第14-15页 |
| ·猪草拉氏病的危害 | 第15页 |
| ·副猪嗜血杆菌的致病机理及毒力相关因子研究 | 第15-17页 |
| ·副猪嗜血杆菌的致病机理研究 | 第15-16页 |
| ·副猪嗜血杆菌的毒力相关因子研究 | 第16-17页 |
| ·副猪嗜血杆菌病原检测方法的研究进展 | 第17-18页 |
| ·细菌分离 | 第17-18页 |
| ·免疫组化法(IHC) | 第18页 |
| ·分子诊断方法 | 第18页 |
| ·乳胶凝集方法的概述 | 第18-20页 |
| 2.研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 3.材料与方法 | 第21-29页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·实验菌株 | 第21页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第21-22页 |
| ·主要培养基 | 第22页 |
| ·相关溶液 | 第22-23页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液 | 第22页 |
| ·腹水纯化IgG相关溶液 | 第22-23页 |
| ·致敏乳胶相关缓冲液 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-29页 |
| ·多肽合成及偶联 | 第23页 |
| ·副猪嗜血杆菌TbpB N端蛋白基因的克隆、表达与蛋白纯化 | 第23-24页 |
| ·TbpB N端蛋白基因序列的克隆 | 第23-24页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第24页 |
| ·TbpB蛋白的表达 | 第24页 |
| ·TbpB蛋白的纯化 | 第24页 |
| ·副猪嗜血杆菌TbpB重组蛋白及合成多肽单克隆抗体的制备 | 第24-27页 |
| ·动物免疫 | 第24-25页 |
| ·骨髓瘤细胞SP2/0的准备和细胞融合 | 第25页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选与克隆 | 第25-26页 |
| ·单克隆抗体的生产 | 第26页 |
| ·单克隆抗体IgG的纯化 | 第26页 |
| ·单克隆抗体(腹水)效价测定 | 第26页 |
| ·单克隆抗体的亚类鉴定 | 第26页 |
| ·单克隆抗体的抗原表位分析 | 第26-27页 |
| ·单克隆抗体IgG羧化乳胶的制备 | 第27页 |
| ·乳胶致敏条件的优化 | 第27页 |
| ·致敏时最佳抗体IgG加入量的选择 | 第27页 |
| ·最佳致敏时间的选择 | 第27页 |
| ·致敏乳胶封闭试剂及浓度的选择 | 第27页 |
| ·乳胶凝集试验(LAT) | 第27-28页 |
| ·敏感性试验 | 第27-28页 |
| ·特异性试验 | 第28页 |
| ·稳定性试验 | 第28页 |
| ·HPS 15个血清型标准菌株及临床分离株的LAT检测 | 第28页 |
| ·参照16S rRNA-PCR方法LAT试验结果 | 第28-29页 |
| 4.结果与分析 | 第29-35页 |
| ·获得重组质粒KG-TbpB | 第29页 |
| ·获得纯化的副猪嗜血杆菌TbpB N端蛋白 | 第29-30页 |
| ·获得融合蛋白及合成多肽的单克隆抗体 | 第30-31页 |
| ·单克隆抗体(腹水)效价测定 | 第30-31页 |
| ·获得纯化的单抗IgG | 第31页 |
| ·单克隆抗体的亚类鉴定结果 | 第31页 |
| ·获得两株针对不同抗原决定簇的单抗 | 第31页 |
| ·制备得到单克隆抗体IgG羧化乳胶 | 第31-32页 |
| ·羧化乳胶最佳单抗IgG加入量 | 第31-32页 |
| ·羧化乳胶最佳致敏时间 | 第32页 |
| ·羧化乳胶最佳封闭试剂及浓度的选择 | 第32页 |
| ·乳胶凝集试验结果(LAT) | 第32-35页 |
| ·乳胶凝集结果的判定 | 第32-33页 |
| ·敏感性试验 | 第33页 |
| ·特异性试验 | 第33页 |
| ·稳定性试验 | 第33-34页 |
| ·HPS 15个血清型标准菌株LAT检测 | 第34页 |
| ·HPS临床分离菌株的LAT及PCR检测对比结果 | 第34-35页 |
| 5.讨论 | 第35-38页 |
| ·诊断蛋白的选择 | 第35-36页 |
| ·致敏乳胶单克隆抗体的选择 | 第36页 |
| ·非特异性凝集的解决办法 | 第36页 |
| ·乳胶凝集方法的应用前景 | 第36-38页 |
| 第2章 利用ERIC-PCR技术调查我国副猪嗜血杆菌的流行情况 | 第38-51页 |
| 1.文献综述 | 第38-41页 |
| ·国内外副猪嗜血杆菌的流行现状 | 第38页 |
| ·副猪嗜血杆菌分型技术的研究进展 | 第38-40页 |
| ·血清学分型 | 第38-39页 |
| ·基因分型 | 第39-40页 |
| ·ERIC-PCR技术的概述 | 第40-41页 |
| 2.研究的目的和意义 | 第41-42页 |
| 3.材料和方法 | 第42-44页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·实验菌株 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-44页 |
| ·PCR引物设计 | 第42页 |
| ·PCR模板的制备 | 第42页 |
| ·16S rRNA PCR反应 | 第42-43页 |
| ·ERIC-PCR反应 | 第43页 |
| ·统计数据 | 第43-44页 |
| 4.结果与分析 | 第44-48页 |
| ·获得副猪嗜血杆菌15个血清型标准菌株ERIC-PCR指纹图谱 | 第44页 |
| ·201株副猪嗜血杆菌ERIC-PCR检测结果 | 第44页 |
| ·不同组织器官分离菌株血清型预测结果 | 第44-46页 |
| ·同一猪场相同时间送检病料中副猪嗜血杆菌ERIC-PCR检测结果 | 第46-47页 |
| ·同一猪场不同时间送检病料中副猪嗜血杆菌ERIC-PCR检测结果 | 第47-48页 |
| 5.讨论 | 第48-51页 |
| ·基因分型技术的优势 | 第48页 |
| ·对ERIC-PCR技术的验证 | 第48-49页 |
| ·利用ERIC-PCR技术制定免疫策略 | 第49-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 个人简介 | 第59页 |
