| 中文摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-19页 |
| 符号说明 | 第19-22页 |
| 第一章 绪论 | 第22-43页 |
| ·糖抗原 | 第23-25页 |
| ·ABO血型抗原 | 第23-24页 |
| ·肿瘤相关糖抗原 | 第24-25页 |
| ·细菌细胞表面多糖及其生物合成 | 第25-29页 |
| ·细菌细胞表面多糖的种类 | 第25-27页 |
| ·细菌多糖的生物合成 | 第27-29页 |
| ·糖基转移酶 | 第29-35页 |
| ·分类与机理 | 第29-30页 |
| ·岩藻糖基转移酶 | 第30-32页 |
| ·半乳糖基转移酶 | 第32-33页 |
| ·糖核苷供体及其生物合成 | 第33-35页 |
| ·结构均一性寡糖合成 | 第35-38页 |
| ·化学合成寡糖 | 第35-37页 |
| ·酶法合成寡糖 | 第37-38页 |
| ·非天然糖与糖生物合成调节 | 第38-42页 |
| ·论文内容大纲 | 第42-43页 |
| 第二章 两种岩藻糖基转移酶的酶学研究与岩藻糖基化寡糖合成 | 第43-62页 |
| ·材料与方法 | 第43-50页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·基因克隆及表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·GST-WbsJ定点突变 | 第45-46页 |
| ·WbsJ和WbwK嵌合体的构建 | 第46-47页 |
| ·蛋白的表达纯化 | 第47-48页 |
| ·岩藻糖基转移酶活性检测 | 第48页 |
| ·岩藻糖基转移酶动力学分析 | 第48页 |
| ·Western Blot分析 | 第48-49页 |
| ·GDP-beads结合检测 | 第49页 |
| ·酶法合成岩藻糖基化寡糖以及产物分析 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-60页 |
| ·重组酶的表达与纯化 | 第50-51页 |
| ·GST-WbsJ和GST-WbwK的受体底物特异性 | 第51-52页 |
| ·WbsJ和WbwK的生化特性研究 | 第52-54页 |
| ·WbsJ保守功能域点突变研究 | 第54-57页 |
| ·WbsJ与WbwK的高变区互换研究 | 第57-59页 |
| ·岩藻糖基化寡糖合成 | 第59-60页 |
| ·讨论与总结 | 第60-62页 |
| 第三章 岩藻糖基供体合成酶研究与多糖生物合成途经改造 | 第62-76页 |
| ·材料与方法 | 第64-68页 |
| ·菌株与质粒 | 第64页 |
| ·FKP的克隆表达与纯化 | 第64页 |
| ·FKP的体外反应和检测 | 第64-65页 |
| ·E.coli O86:B7 GDP-Fuc从头合成途径的敲除与基因补偿 | 第65-66页 |
| ·岩藻糖类似物体内整合以及LPS结构分析 | 第66-67页 |
| ·体外Cu(Ⅰ)催化[3+2]环加反应标记多糖 | 第67页 |
| ·化学反应标记细菌活细胞 | 第67-68页 |
| ·结果与讨论 | 第68-75页 |
| ·FKP的表达纯化与活性鉴定 | 第68-69页 |
| ·FKP底物适应性研究 | 第69-70页 |
| ·E.coli O86:B7菌株GDP-Fuc合成途径改造 | 第70-71页 |
| ·岩藻糖类似物整合入细菌细胞表面多糖 | 第71-73页 |
| ·点击化学介导叠氮整合LPS的荧光标记 | 第73-74页 |
| ·化学反应标记活细胞 | 第74-75页 |
| ·本章小结 | 第75-76页 |
| 第四章 一种β1,3-半乳糖基转移酶的酶学研究以及在寡糖合成中的应用 | 第76-86页 |
| ·材料与方法 | 第77-79页 |
| ·菌株,质粒和基因克隆 | 第77-78页 |
| ·糖基转移酶的表达与纯化 | 第78页 |
| ·糖基转移酶活性测定 | 第78页 |
| ·金属离子和pH对GST-WbgO酶活的影响 | 第78页 |
| ·GST-WbgO重组酶的动力学分析 | 第78-79页 |
| ·GST-WbgO催化的乳-N-二糖,乳-N-三糖和乳-N-四糖合成 | 第79页 |
| ·寡糖产物分析 | 第79页 |
| ·结果与讨论 | 第79-85页 |
| ·β1,3-GalT(WbgO)的鉴定 | 第79-81页 |
| ·GST-Wbg O的过量表达与纯化 | 第81页 |
| ·pH条件、缓冲液系统和金属离子对GST-WbgO酶活的影响 | 第81-82页 |
| ·GST-WbgO的底物特异性和动力学分析 | 第82-83页 |
| ·GST-WbgO催化的LNT合成以及产物分析 | 第83-85页 |
| ·本章小结 | 第85-86页 |
| 全文总结 | 第86-90页 |
| 附录和附图 | 第90-109页 |
| Ⅰ.岩藻糖基寡糖Fucα1,2Galβ-O-Me和Fucα1,2Lacβ-N3的NMR谱图 | 第91-93页 |
| Ⅱ.岩藻糖及其类似物FKP反应的CE检测结果 | 第93-98页 |
| Ⅲ.岩藻糖类似物整合后重塑LPS的CE-MS鉴定结果 | 第98-103页 |
| Ⅳ.乳-N-系列寡糖NMR检测谱图 | 第103-109页 |
| 参考文献 | 第109-126页 |
| 致谢 | 第126-128页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第128-130页 |
| 外文论文 | 第130-159页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第159页 |
