| 摘要 | 第1-15页 |
| Abstract | 第15-20页 |
| 本文缩写词表 | 第20-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-42页 |
| 1 代谢工程的简介及应用 | 第21-22页 |
| 2 透明质酸 | 第22-26页 |
| ·透明质酸分布 | 第22-23页 |
| ·透明质酸结构与功能 | 第23-26页 |
| 3 透明质酸的生物合成 | 第26-33页 |
| ·透明质酸合酶 | 第26-33页 |
| ·透明质酸合酶催化模型的建立 | 第27-28页 |
| ·透明质酸合酶家族 | 第28-30页 |
| ·透明质酸合酶的结构特点 | 第30-32页 |
| ·透明质酸合酶调节透明质酸分子量机制的研究 | 第32-33页 |
| 4 透明质酸的生产现状 | 第33-34页 |
| 5 基因工程改造透明质酸生产菌株 | 第34-35页 |
| 6 乳酸乳球菌 | 第35-36页 |
| 7 NICE系统 | 第36-39页 |
| 8 展望 | 第39-41页 |
| 9 本文研究工作 | 第41-42页 |
| 第二章 透明质酸合成途径在乳酸乳球菌中的建立 | 第42-81页 |
| 1 材料和方法 | 第42-51页 |
| ·菌株和质粒 | 第42-43页 |
| ·分子克隆用酶和试剂 | 第43-45页 |
| ·培养基 | 第45-46页 |
| ·微生物学技术 | 第46页 |
| ·菌体的生长 | 第46页 |
| ·菌种的保存 | 第46页 |
| ·发酵生长曲线的测定 | 第46页 |
| ·分子生物学方法 | 第46-51页 |
| ·质粒的提取 | 第46-47页 |
| ·兽疫链球菌染色体的提取 | 第47-48页 |
| ·DNA纯度和浓度的测定 | 第48页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第48页 |
| ·PCR反应 | 第48页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳DNA片段的回收 | 第48页 |
| ·限制性核酸内切酶酶切 | 第48页 |
| ·酶切片段的去磷酸化和连接 | 第48-49页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第49-50页 |
| ·乳酸乳球菌的转化方法 | 第50页 |
| ·Nisin诱导表达目的蛋白 | 第50页 |
| ·乳酸乳球菌菌体破碎 | 第50页 |
| ·蛋白质电泳 | 第50-51页 |
| ·透明质酸含量的测定 | 第51页 |
| ·透明质酸的分离纯化 | 第51页 |
| 2 结果与讨论 | 第51-79页 |
| ·乳酸乳球菌转化方法的建立 | 第51-53页 |
| ·表达szHasA、szHasB、szHasC的乳酸乳球菌重组菌株的构建 | 第53-68页 |
| ·基因片段的获得 | 第53-57页 |
| ·带有szHasA、szHasB、szHasC基因和szHasABC的重组质粒pNZ8148-szHasA、pNZ8148-szHasB、pNZ8148-szHasC和pNZ8148-szHasABC的构建 | 第57-62页 |
| ·表达szHasA、szHasB、szHasC基因和szHasABC的工程菌株的构建 | 第62-63页 |
| ·乳酸乳球菌工程菌株诱导条件的优化 | 第63-64页 |
| ·szHasA、szHasB、szHasC基因和szHasABC在工程菌株中的表达 | 第64-66页 |
| ·乳酸乳球菌工程菌株合成HA的含量分析 | 第66-68页 |
| ·合成食品级透明质酸乳酸乳球菌工程菌株的构建 | 第68-79页 |
| ·重组HA合成操纵子的构建 | 第69-75页 |
| ·合成食品级HA的乳酸乳球菌工程菌株的构建 | 第75-77页 |
| ·工程菌株NFHA02和NFHA03合成HA含量的分析 | 第77-79页 |
| 3 小结 | 第79-81页 |
| 第三章 微生物合成透明质酸分子量调控机制的初步研究 | 第81-100页 |
| 1 材料和方法 | 第81-87页 |
| ·菌株和质粒 | 第81-82页 |
| ·分子克隆用酶和试剂 | 第82页 |
| ·培养基 | 第82-83页 |
| ·微生物学技术 | 第83页 |
| ·菌体的生长 | 第83页 |
| ·菌种的保存 | 第83页 |
| ·发酵生长曲线的测定 | 第83页 |
| ·分子生物学方法 | 第83-86页 |
| ·大肠杆菌中质粒的提取 | 第83页 |
| ·兽疫链球菌染色体的提取 | 第83页 |
| ·DNA纯度和浓度的测定 | 第83页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第83页 |
| ·乳酸乳球菌总RNA的提取 | 第83-84页 |
| ·RNA电泳 | 第84-85页 |
| ·PCR反应 | 第85页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收 | 第85页 |
| ·限制性核酸内切酶酶切 | 第85页 |
| ·酶切片段的去磷酸化和连接 | 第85-86页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第86页 |
| ·乳酸乳球菌的转化方法 | 第86页 |
| ·诱导表达目的蛋白 | 第86页 |
| ·乳酸乳球菌菌体破碎 | 第86页 |
| ·蛋白质电泳 | 第86页 |
| ·透明质酸含量的测定 | 第86页 |
| ·透明质酸分离纯化 | 第86-87页 |
| 2 结果与讨论 | 第87-98页 |
| ·表达szHasA和szHasB基因的重组菌株的构建 | 第87-91页 |
| ·szHasA和szHasB在工程菌株的表达 | 第91-93页 |
| ·调控工程菌株中透明质酸合酶的表达 | 第93页 |
| ·调控工程菌株中UDP-葡萄糖脱氢酶的表达 | 第93-95页 |
| ·szHasA/szHasB mRNA转录水平比率对HA重均分子量的影响 | 第95-98页 |
| 3 小结 | 第98-100页 |
| 全文总结 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第111-112页 |
| 外文论文1 | 第112-121页 |
| 外文论文2 | 第121-139页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第139页 |
