| 中文摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号与缩略语 | 第9-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 杆状病毒介绍 | 第10-11页 |
| 1.1.1 杆状病毒生物学特征 | 第10-11页 |
| 1.1.2 杆状病毒-昆虫细胞表达系统的优点和缺点 | 第11页 |
| 1.2 杆状病毒作为基因转移载体的研究进展 | 第11-14页 |
| 1.2.1 对杆状病毒进入哺乳动物细胞机制 | 第11-12页 |
| 1.2.2 杆状病毒转导哺乳动物细胞的制约因素 | 第12-14页 |
| 1.3 杆状病毒作为疫苗载体的应用 | 第14-17页 |
| 1.3.1 杆状病毒介导的天然免疫 | 第15页 |
| 1.3.2 杆状病毒作为动物和人类疾病的疫苗载体 | 第15-17页 |
| 1.4 本文的研究框架、目的与意义 | 第17-19页 |
| 1.5 本研究的实验技术路线 | 第19-20页 |
| 1.5.1 重组杆状病毒转移载体的构建策略 | 第19-20页 |
| 1.5.2 重组杆状病毒的扩毒和外源基因表达 | 第20页 |
| 1.6 课题资助名称 | 第20-21页 |
| 第2章 材料与方法 | 第21-56页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-33页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第21页 |
| 2.1.2 供试菌种和质粒 | 第21-27页 |
| 2.1.3 扩增引物 | 第27-29页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.1.5 主要分子生物学及生化试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.6 主要缓冲液及试剂配制 | 第31-33页 |
| 2.2 试验方法 | 第33-56页 |
| 2.2.1 重组转移载体的构建 | 第33-48页 |
| 2.2.2 重组杆状病毒穿梭载体Bacmid DNA的获得 | 第48-49页 |
| 2.2.3 重组杆状病毒穿梭载体Bacmid DNA转染Sj9细胞 | 第49-52页 |
| 2.2.4 重组杆状病毒的扩培及滴度测定 | 第52-53页 |
| 2.2.5 CHO-K1细胞和鸡原代细胞的培养 | 第53-54页 |
| 2.2.6 重组杆状病毒在CHO-K1细胞和鸡胚成纤维细胞中表达 | 第54页 |
| 2.2.7 外源基因在Sj9昆虫细胞中的表达 | 第54页 |
| 2.2.8 外源基因eGFP的表达和检测 | 第54-56页 |
| 第3章 结果 | 第56-91页 |
| 3.1 元件的制备与鉴定 | 第56-59页 |
| 3.1.1 pT-iel的制备 | 第56页 |
| 3.1.2 pT-iel的鉴定 | 第56-57页 |
| 3.1.3 pT-gv的制备 | 第57-58页 |
| 3.1.4 pT-gv的鉴定 | 第58-59页 |
| 3.2 重组转移载体PTXY系列的构建 | 第59-68页 |
| 3.2.1 重组转移载体pTXY-eGFP的构建 | 第59-61页 |
| 3.2.2 重组转移载体pTXY-ITRs-eGFP的构建 | 第61-64页 |
| 3.2.3 重组转移载体pTXY-control-eGFP的鉴定 | 第64-65页 |
| 3.2.4 重组转移载体pTXY-gv-eGFP和pTXY-gv-ITRs-eGFP的构建 | 第65-67页 |
| 3.2.5 重组转移载体pTXY-gv-ITRs-eGFP的鉴定 | 第67-68页 |
| 3.3 含有WPRE系列重组转移载体的鉴定 | 第68-70页 |
| 3.3.1 Gp64SP片段的PCR克隆 | 第68-69页 |
| 3.3.2 带有粘性末端的杆状病毒载体和Gp64SP片段的制备和连接 | 第69页 |
| 3.3.3 含有WPRE系列重组转移载体的鉴定 | 第69-70页 |
| 3.4 重组杆状病毒穿梭载体BACMD的鉴定 | 第70-74页 |
| 3.4.1 重组穿梭转移载体Bacmid SD系列的鉴定 | 第71页 |
| 3.4.2 重组穿梭转移载体Bacmid LM系列的鉴定 | 第71-72页 |
| 3.4.3 重组穿梭转移载体Bacmid WK系列的鉴定 | 第72-73页 |
| 3.4.4 重组穿梭转移载体Bacmid TXY系列的鉴定 | 第73页 |
| 3.4.5 重组穿梭转移载体Bacmid WPRE系列的鉴定 | 第73-74页 |
| 3.5 重组杆状病毒穿梭载体BACMID转染Sj9细胞 | 第74-76页 |
| 3.5.1 Sj9昆虫细胞生长曲线的绘制 | 第74-75页 |
| 3.5.2 Sj9昆虫细胞正常及病变形态比较 | 第75-76页 |
| 3.5.3 P1代重组杆状病毒的收获 | 第76页 |
| 3.6 重组杆状病毒的扩增及滴度测定 | 第76-78页 |
| 3.6.1 重组杆状病毒滴度测定 | 第76-77页 |
| 3.6.2 重组杆状病毒的PCR鉴定 | 第77-78页 |
| 3.7 重组杆状病毒介导EGFP基因在细胞中的表达及分析 | 第78-91页 |
| 3.7.1 CHO-K1细胞和鸡原代细胞的形态 | 第78页 |
| 3.7.2 重组杆状病毒介导eGFP基因在CHO-K1中的表达 | 第78-82页 |
| 3.7.3 重组杆状病毒介导eGFP基因在鸡胚成纤维细胞中的表达 | 第82-86页 |
| 3.7.4 重组杆状病毒在Sj9细胞中的表达情况 | 第86-91页 |
| 第4章 讨论 | 第91-98页 |
| 4.1 高效价病毒的获得 | 第91页 |
| 4.2 不同启动子启动的EGFP基因在CHO细胞和鸡原代细胞中表达的比较 | 第91-94页 |
| 4.2.1 重组杆状病毒侵染的最优条件 | 第91-92页 |
| 4.2.2 不同启动子的启动效率影响 | 第92-94页 |
| 4.3 调控元件WPRE对EGFP蛋白在CHO细胞和鸡胚成纤维细胞中表达的影响 | 第94-95页 |
| 4.4 调控元件WPRE和VSVGED对EGFP蛋白在CHO细胞和鸡原代细胞中表达的协同作用影响 | 第95-97页 |
| 4.4.1 WPRE和VSVGED的协同作用 | 第95-97页 |
| 4.4.2 VSVGED与VSVG元件对Sf9细胞的作用 | 第97页 |
| 4.5 调控元件TRs对EGFP蛋白在CHO细胞和鸡胚成纤维细胞中表达的影响 | 第97-98页 |
| 第5章 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-108页 |
| 附录 | 第108-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第132-133页 |
