| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 研究背景 | 第12-18页 |
| 1.1 从江香猪概述 | 第12页 |
| 1.2 丙酮酸脱氢酶激酶家族 | 第12-13页 |
| 1.3 PDK4基因研究概述 | 第13-15页 |
| 1.3.1 PDK4基因结构特点 | 第13页 |
| 1.3.2 PDK4基因的生物学功能 | 第13-14页 |
| 1.3.3 PDK4基因在畜禽中研究现状 | 第14-15页 |
| 1.4 FGF家族研究概述 | 第15页 |
| 1.5 FGF10基因研究概述 | 第15-17页 |
| 1.5.1 FGF10基因生物学特性 | 第15-16页 |
| 1.5.2 FGF10基因的生物学功能及研究现状 | 第16-17页 |
| 1.6 脂肪细胞分化过程关键调控因子 | 第17-18页 |
| 2 本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 PDK4、FGF10基因的克隆及组织表达分析 | 第20-35页 |
| 1 试验材料 | 第20-22页 |
| 1.1 试验动物与样品 | 第20页 |
| 1.2 主要试验试剂 | 第20页 |
| 1.3 试验仪器设备 | 第20-21页 |
| 1.4 常用试剂的配置 | 第21-22页 |
| 2 试验方法 | 第22-25页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第22页 |
| 2.2 组织总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.3 RNA纯度及浓度检测 | 第23页 |
| 2.4 合成cDNA | 第23-24页 |
| 2.5 PCR扩增 | 第24页 |
| 2.6 PDK4、FGF10基因序列分析 | 第24-25页 |
| 2.7 实时荧光定量PCR | 第25页 |
| 2.8 数据统计分析 | 第25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-32页 |
| 3.1 RNA纯度检测 | 第25-26页 |
| 3.2 从江香猪PDK4、FGF10基因RT-PCR扩增结果 | 第26页 |
| 3.3 从江香猪PDK4、FGF10基因测序结果分析 | 第26-27页 |
| 3.4 从江香猪PDK4、FGF10蛋白相关生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 3.5 实时荧光定量PCR结果分析 | 第28-32页 |
| 3.5.1 基因克隆 | 第28-29页 |
| 3.5.2 qRT-PCR产物特异性分析 | 第29-30页 |
| 3.5.3 不同组织中PDK4基因的表达分析 | 第30-31页 |
| 3.5.4 不同组织中FGF10基因的表达分析 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 5 小结 | 第34-35页 |
| 第三章 PDK4、FGF10基因的过表达载体构建 | 第35-45页 |
| 1 试验材料 | 第35-36页 |
| 1.1 试验样品、菌株和载体 | 第35页 |
| 1.2 试验仪器设备 | 第35页 |
| 1.3 试验试剂 | 第35页 |
| 1.4 常用试剂配置 | 第35-36页 |
| 2 试验方法 | 第36-41页 |
| 2.1 感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 2.2 pUCM-T-PDK4、pUCM-T-FGF10重组质粒的构建 | 第37-39页 |
| 2.2.1 PDK4、FGF10基因与pUCM-T载体的连接 | 第37页 |
| 2.2.2 连接产物的转化 | 第37-38页 |
| 2.2.3 重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第38页 |
| 2.2.4 重组质粒的提取 | 第38页 |
| 2.2.5 重组质粒的测序鉴定 | 第38-39页 |
| 2.2.6 菌种的保存 | 第39页 |
| 2.3 pEGFP-C1-PDK4、pEGFP-C1-FGF10重组质粒的构建 | 第39-41页 |
| 2.3.1 重组质粒胶回收 | 第39-40页 |
| 2.3.2 目的片段与pEGFP-C1载体的连接 | 第40页 |
| 2.3.3 连接产物的转化 | 第40页 |
| 2.3.4 pEGFP-C1-PDK4、pEGFP-C1-FGF10重组质粒的菌液PCR | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-44页 |
| 3.1 重组质粒pUCM-T-PDK4、pUCM-T-FGF10的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2 重组质粒pEGFP-C1-PDK4、pEGFP-C1-FGF10的鉴定 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44页 |
| 5 小结 | 第44-45页 |
| 第四章 PDK4、FGF10基因干扰载体构建 | 第45-52页 |
| 1 试验材料 | 第45页 |
| 1.1 试验材料及主要试剂 | 第45页 |
| 1.2 试验仪器设备 | 第45页 |
| 2 试验方法 | 第45-48页 |
| 2.1 PDK4基因干扰载体的构建 | 第45-47页 |
| 2.1.1 寡核苷酸的设计及合成 | 第45-46页 |
| 2.1.2 引物退火 | 第46页 |
| 2.1.3 载体与siRNA的连接 | 第46-47页 |
| 2.1.4 连接产物的转化及鉴定 | 第47页 |
| 2.2 FGF10基因干扰载体的构建 | 第47-48页 |
| 2.2.1 siRNA的设计及合成 | 第47-48页 |
| 2.2.2 引物退火 | 第48页 |
| 2.2.3 载体与siRNA的连接 | 第48页 |
| 2.2.4 连接产物的转化及鉴定 | 第48页 |
| 3 结果 | 第48-50页 |
| 3.1 pLVX-ShRNA2-puro-sPDK4载体酶切鉴定 | 第48-49页 |
| 3.2 pLVX-ShRNA2-puro-sPDK4载体测序鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3 pGPU6/GFP/Neo-shRNA-sFGF10测序结果 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 5 小结 | 第51-52页 |
| 第五章 PDK4、FGF10基因对脂质代谢的影响 | 第52-71页 |
| 1 试验材料 | 第52-54页 |
| 1.1 试验动物 | 第52页 |
| 1.2 试验仪器设备 | 第52页 |
| 1.3 试验主要试剂与器材 | 第52-53页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第53-54页 |
| 2 试验方法 | 第54-58页 |
| 2.1 肌内前体脂肪细胞的原代培养 | 第54页 |
| 2.2 细胞的传代培养 | 第54-55页 |
| 2.3 细胞的诱导分化 | 第55页 |
| 2.4 细胞分化PDK4、FGF10基因的时序表达 | 第55-56页 |
| 2.5 重组质粒的瞬时转染 | 第56-57页 |
| 2.5.1 无内毒素质粒的提取 | 第56-57页 |
| 2.5.2 瞬时转染 | 第57页 |
| 2.6 PDK4、FGF10基因最佳干扰载体的筛选 | 第57-58页 |
| 2.7 实时荧光定量PCR | 第58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-68页 |
| 3.1 从江香猪肌内前体脂肪细胞形态观察 | 第58-59页 |
| 3.2 诱导分化及油红O染色 | 第59-60页 |
| 3.3 细胞分化PDK4、FGF10基因的时序表达 | 第60-61页 |
| 3.4 PDK4、FGF10基因最佳干扰载体的筛选 | 第61-64页 |
| 3.4.1 PDK4基因干扰载体的瞬时转染 | 第61-62页 |
| 3.4.2 PDK4基因干扰效率的检测 | 第62-63页 |
| 3.4.3 FGF10基因干扰载体的瞬时转染 | 第63-64页 |
| 3.4.4 FGF10基因干扰效率的检测 | 第64页 |
| 3.5 pEGFP-C1-PDK4、pEGFP-C1-FGF10的瞬时转染 | 第64-65页 |
| 3.6 PDK4、FGF10基因上调对脂代谢相关基因表达的影响 | 第65-66页 |
| 3.7 PDK4、FGF10基因下调对脂代谢相关基因表达的影响 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-69页 |
| 5 小结 | 第69-71页 |
| 第六章 结论与展望 | 第71-72页 |
| 1 结论 | 第71页 |
| 2 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 附录 | 第82-84页 |
