| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 前言 | 第12-30页 |
| 1.1 核受体及孤儿核受体 | 第12-13页 |
| 1.1.1 核受体超家族 | 第12-13页 |
| 1.2 孤儿核受体亚家族NR4A | 第13-17页 |
| 1.2.1 NR4A亚家族 | 第13-14页 |
| 1.2.2 NR4A亚家族的结构与功能 | 第14-16页 |
| 1.2.3 孤儿核受体Nurr1与Nor1 | 第16-17页 |
| 1.3 孤儿核受体Nur77与共激活因子SRC2 | 第17-19页 |
| 1.3.1 Nur77概述 | 第17页 |
| 1.3.2 Nur77与辅调节因子 | 第17-19页 |
| 1.4 共激活因子SRC2 | 第19-23页 |
| 1.4.1 p160类固醇受体共激活因子(p160 Steroid Receptor Co-activator,SRC)家族 | 第19-20页 |
| 1.4.2 SRC家族的结构与功能 | 第20-21页 |
| 1.4.3 SRC家族与核受体的相互作用 | 第21-22页 |
| 1.4.4 SRC2与Nur77的相互作用 | 第22-23页 |
| 1.5 结构生物学和蛋白晶体学 | 第23-26页 |
| 1.5.1 结构生物学简介 | 第23-24页 |
| 1.5.2 蛋白晶体学简介 | 第24-25页 |
| 1.5.3 蛋白质结晶常用方法 | 第25-26页 |
| 1.6 X射线晶体学解析蛋白质结构 | 第26-29页 |
| 1.6.1 目的蛋白的表达与纯化 | 第27页 |
| 1.6.2 蛋白质结晶与晶体优化 | 第27页 |
| 1.6.3 衍射数据的收集和结构解析 | 第27-29页 |
| 1.7 研究目的和意义 | 第29-30页 |
| 2 实验材料和方法 | 第30-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-32页 |
| 2.1.1 主要实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.1.2 主要实验材料 | 第31-32页 |
| 2.1.3 质粒和菌株 | 第32页 |
| 2.2 实验相关试剂的配制 | 第32-36页 |
| 2.2.1 培养基与抗生素的配制 | 第32-33页 |
| 2.2.2 凝胶电泳所需试剂的配制 | 第33-34页 |
| 2.2.3 制备感受态细胞所需试剂的的配制 | 第34-35页 |
| 2.2.4 蛋白表达与纯化相关试剂的配制 | 第35页 |
| 2.2.5 Western Blot实验相关试剂的配制 | 第35页 |
| 2.2.6 蛋白结晶相关试剂的配制 | 第35-36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-51页 |
| 2.3.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 2.3.2 目的基因的扩增及融合表达载体的构建 | 第37-43页 |
| 2.3.3 目的蛋白的表达 | 第43-44页 |
| 2.3.4 目的蛋白的纯化 | 第44-46页 |
| 2.3.5 蛋白质结晶及结构解析 | 第46-48页 |
| 2.3.6 蛋白与蛋白、蛋白与多肽之间相互作用的检测 | 第48-51页 |
| 3 实验结果 | 第51-74页 |
| 3.1 Nur77 LBD与包含SRC2的RID区片段的多肽复合物结构的研究 | 第51-63页 |
| 3.1.1 表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 3.1.2 目的蛋白Nur77 LBD与SRC2-140的表达以及复合物的纯化 | 第52-58页 |
| 3.1.3 复合物的晶体结构 | 第58-63页 |
| 3.2 Nur77 LBD与SRC2片段的相互作用研究 | 第63-69页 |
| 3.2.1 SRC2多肽与Nur77 LBD/pGEX-4T-1的载体质粒构建 | 第63-64页 |
| 3.2.2 SRC2多肽与Nur77 LBD GST的试表达 | 第64-65页 |
| 3.2.3 用GST pull-down实验的方法验证Nur77与SRC2的相互作用 | 第65-67页 |
| 3.2.4 用BLI的实验方法验证Nur77与SRC2的相互作用 | 第67-69页 |
| 3.3 Nur77 LBD的截短片段与SRC2多肽片段的相互作用研究 | 第69-74页 |
| 3.3.1 Nur77 LBD截短片段的融合蛋白载体构建 | 第69-70页 |
| 3.3.2 带GST标签的Nur77 LBD截短融合蛋白试表达 | 第70-71页 |
| 3.3.3 GST pull-down实验 | 第71-74页 |
| 4 讨论与展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
