| 中文摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 棕榈酰化修饰 | 第11-13页 |
| 1.1.1 棕榈酰化修饰的简介 | 第11-12页 |
| 1.1.2 棕榈酰化修饰的生理功能 | 第12-13页 |
| 1.2 棕榈酰化修饰的调控 | 第13-18页 |
| 1.2.1 DHHC家族蛋白的结构与催化机制 | 第13-15页 |
| 1.2.2 DHHC家族蛋白活性的调节 | 第15-16页 |
| 1.2.3 DHHCs的特异性 | 第16-17页 |
| 1.2.4 棕榈酰化酶DHHC5 | 第17-18页 |
| 1.3 BioID方法介绍 | 第18-20页 |
| 1.4 立题背景、课题的研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料和方法 | 第21-44页 |
| 2.1 DNA相关实验 | 第21-29页 |
| 2.1.1 PCR | 第21-22页 |
| 2.1.2 小提 | 第22页 |
| 2.1.3 中提 | 第22-25页 |
| 2.1.4 DNA电泳、胶回收 | 第25-26页 |
| 2.1.5 DNA酶切 | 第26页 |
| 2.1.6 T4连接 | 第26页 |
| 2.1.7 质粒转化涂板 | 第26-27页 |
| 2.1.8 Crisp-Cas9基因敲除质粒构建 | 第27-28页 |
| 2.1.9 酚氯仿抽提基因组 | 第28页 |
| 2.1.10 转圈法质粒点突 | 第28-29页 |
| 2.2 蛋白相关实验 | 第29-36页 |
| 2.2.1 BCA法测定蛋白浓度 | 第29-30页 |
| 2.2.2 western blot | 第30-32页 |
| 2.2.3 HRP-streptavidin检测biotin共价修饰蛋白 | 第32页 |
| 2.2.4 考马斯亮蓝染色 | 第32页 |
| 2.2.5 Acyl-rac法鉴定蛋白棕榈酰化修饰 | 第32-34页 |
| 2.2.6 TCA沉淀 | 第34页 |
| 2.2.7 BioID技术鉴定DHHC5相互作用蛋白 | 第34-36页 |
| 2.3 细胞相关实验 | 第36-44页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第36-38页 |
| 2.3.2 PEI转染 | 第38-39页 |
| 2.3.3 慢病毒包装 | 第39页 |
| 2.3.4 慢病毒感染 | 第39-40页 |
| 2.3.5 细胞免疫荧光染色 | 第40-41页 |
| 2.3.6 过表达稳转细胞系构建 | 第41-42页 |
| 2.3.7 敲除细胞系的构建 | 第42-44页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第44-63页 |
| 3.1 建立BioID实验方法 | 第44-46页 |
| 3.2 pull down DHHC5的底物、质谱鉴定 | 第46-51页 |
| 3.3 细胞黏着、RTKs、ARVC疾病相关蛋白具有棕榈酰化修饰 | 第51-52页 |
| 3.4 DHHC5调控PKP2入核 | 第52-55页 |
| 3.5 DHHC5调控AAK1的定位 | 第55-57页 |
| 3.6 FRS2是DHHC5的底物 | 第57-59页 |
| 3.7 EPHA2是DHHC5的底物 | 第59-61页 |
| 3.8 讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
