| 搪要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 引言 | 第8-16页 |
| 1.1 瓜实蝇简介 | 第8-10页 |
| 1.2 昆虫性别决定 | 第10-13页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9技术 | 第13-15页 |
| 1.4 技术线路 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第16页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第16页 |
| 2.1.3 主要试剂盒和试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.4 部分溶液配制 | 第17-18页 |
| 2.2 试验方法 | 第18-33页 |
| 2.2.1 瓜实蝇的饲养 | 第18页 |
| 2.2.2 Bcutra基因鉴定 | 第18-25页 |
| 2.2.3 Bcutra基因结构分析 | 第25-27页 |
| 2.2.4 序列分析与进化树构建 | 第27页 |
| 2.2.5 Bcutra不同时间性别发育表达分析 | 第27-29页 |
| 2.2.6 利用CRISPR/Cas9技术敲除Bcutra基因 | 第29-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-50页 |
| 3.1 瓜实蝇总RNA提取 | 第33页 |
| 3.2 Bcutra基因中间片段的获得 | 第33-34页 |
| 3.3 用RACE技术扩增Bcutra基因全长 | 第34-35页 |
| 3.4 Bcutra基因结构分析 | 第35-38页 |
| 3.4.1 Bcutra基因组DNA提取与PCR扩增 | 第35页 |
| 3.4.2 Bcutra基因结构和剪接类型 | 第35-38页 |
| 3.5 瓜实蝇tra基因生物信息学分析 | 第38-45页 |
| 3.5.1 Bcutra核苷酸序列与氨基酸序列 | 第38-40页 |
| 3.5.2 Bcutra氨基酸序列比对 | 第40-41页 |
| 3.5.3 TRA系统发育分析 | 第41-42页 |
| 3.5.4 BcuTRA氨基酸序列理化性质分析与高级结构预测 | 第42-45页 |
| 3.6 Bcutra不同发育时间表达分析 | 第45-47页 |
| 3.6.1 RNA提取 | 第45-46页 |
| 3.6.2 半定量PT-PCR分析Bcutra不同时期的表达 | 第46-47页 |
| 3.7 利用CRISPR/Cas9技术敲除Bcutra基因 | 第47-50页 |
| 3.7.1 Cas9载体线性化 | 第47-48页 |
| 3.7.2 Cas9 mRNA合成 | 第48-49页 |
| 3.7.3 sgRNA体外合成 | 第49页 |
| 3.7.4 构建Bcutra基因的靶向编辑模型 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附件 | 第64-65页 |
| 在读期间与课题有关的研究成果 | 第65页 |
