| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略词表 | 第5-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-13页 |
| 1 淀粉酶 | 第8页 |
| 1.1 淀粉酶的来源和发展历史 | 第8页 |
| 1.2 淀粉酶的分类 | 第8页 |
| 2 α-淀粉酶 | 第8-10页 |
| 2.1 α-淀粉酶的定义 | 第8-9页 |
| 2.2 α-淀粉酶的产生菌 | 第9页 |
| 2.3 α-淀粉酶的作用机理 | 第9页 |
| 2.4 α-淀粉酶的家族分类 | 第9页 |
| 2.5 α-淀粉酶的应用 | 第9-10页 |
| 3 碳水化合物结合结构域(CBM) | 第10页 |
| 4 淀粉结合结构域(SBD) | 第10-11页 |
| 5 本研究的目的,意义及主要研究内容 | 第11-13页 |
| 第二章 α-淀粉酶AmyP的鉴定、系统分类和酶学性质研究 | 第13-31页 |
| 1 实验材料 | 第13-14页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第13页 |
| 1.2 酶和主要试剂 | 第13页 |
| 1.3 培养基和溶液的配制 | 第13-14页 |
| 1.4 实验仪器 | 第14页 |
| 2 实验方法 | 第14-19页 |
| 2.1 电转化感受态BL21的制备方法 | 第14-15页 |
| 2.2 重组质粒的电转化 | 第15页 |
| 2.3 重组蛋白的IPTG诱导表达和纯化 | 第15-16页 |
| 2.4 葡萄糖标准曲线的测定 | 第16-17页 |
| 2.5 AmyP酶学性质的测定 | 第17-19页 |
| 2.6 生物信息学分析 | 第19页 |
| 3 实验结果 | 第19-30页 |
| 3.1 序列比对 | 第19-20页 |
| 3.2 pET32a-AmyP质粒的抽提和酶切验证 | 第20页 |
| 3.3 pET32a-AmyP的诱导表达和纯化 | 第20-21页 |
| 3.4 AmyP对底物的特异性水解 | 第21-22页 |
| 3.5 水解产物分析 | 第22-23页 |
| 3.6 酶学性质 | 第23-25页 |
| 3.7 酶切方式的分析(HPLC) | 第25-26页 |
| 3.8 AmyP和GH13家族成员的保守序列分析 | 第26-28页 |
| 3.9 AmyP系统进化树的构建 | 第28-30页 |
| 4 本章结果和讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 AmyP C末端结构域的功能分析 | 第31-41页 |
| 1 实验材料 | 第31-32页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第31页 |
| 1.2 酶和主要试剂 | 第31页 |
| 1.3 培养基和溶剂的配制: | 第31-32页 |
| 1.4 实验仪器 | 第32页 |
| 2 实验方法 | 第32-36页 |
| 2.1 实验方案的设计 | 第32-33页 |
| 2.2 蛋白质浓度的测定(Bradford法) | 第33页 |
| 2.3 AmyP_(ΔSBD)和假定SBD的克隆 | 第33-35页 |
| 2.4 AmyP、AmyP_(△SBD)、假定SBD对大米生淀粉的水解 | 第35页 |
| 2.5 假定的SBD对大米生淀粉的吸附反应 | 第35-36页 |
| 3 实验结果 | 第36-40页 |
| 3.1 AmyP C末端的二级结构预测 | 第36页 |
| 3.2 AmyP_(ΔSBD)和假定的SBD的克隆 | 第36-38页 |
| 3.3 pET32a-AmyP_(ΔSBD)和pET22b-SBD的诱导表达与纯化 | 第38-39页 |
| 3.4 AmyP、AmyP_(ΔSBD)和假定的SBD对大米生淀粉水解活性的比较 | 第39页 |
| 3.5 假定的SBD对大米生淀粉的吸附实验 | 第39-40页 |
| 4 本章结果和结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 附录 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 研究生期间发表论文情况 | 第47页 |
