| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 原核表达系统概述 | 第12-17页 |
| 1.1.1 大肠杆菌表达系统 | 第12-14页 |
| 1.1.2 芽胞杆菌表达系统 | 第14-17页 |
| 1.2 信号肽酶及信号肽肽酶对蛋白分泌的影响 | 第17-19页 |
| 1.2.1 信号肽酶简介 | 第17-18页 |
| 1.2.2 信号肽酶对外源蛋白分泌的影响 | 第18页 |
| 1.2.3 信号肽肽酶简介 | 第18-19页 |
| 1.2.4 信号肽肽酶对外源蛋白分泌的影响 | 第19页 |
| 1.3 原核生物启动子概述 | 第19-22页 |
| 1.3.1 原核生物启动子结构 | 第19-20页 |
| 1.3.2 芽胞杆菌启动子 | 第20-22页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第22-24页 |
| 第2章 材料与方法 | 第24-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-37页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第24-29页 |
| 2.1.2 PCR引物 | 第29-32页 |
| 2.1.3 培养基和实验所用抗生素浓度 | 第32-33页 |
| 2.1.4 主要工具酶和试剂 | 第33-34页 |
| 2.1.5 抽提液和缓冲液 | 第34-36页 |
| 2.1.6 主要实验仪器 | 第36-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-46页 |
| 2.2.1 核酸水平实验 | 第37-39页 |
| 2.2.2 载体构建 | 第39-40页 |
| 2.2.3 重组质粒转化及基因整合 | 第40-41页 |
| 2.2.4 摇瓶发酵培养条件 | 第41页 |
| 2.2.5 聚丙烯氨酸凝胶电泳 | 第41-42页 |
| 2.2.6 纳豆激酶酶活测定 | 第42页 |
| 2.2.7 α-淀粉酶酶活力测定 | 第42-43页 |
| 2.2.8 RNA抽提方法 | 第43-44页 |
| 2.2.9 mRNA表达量检测方法 | 第44-45页 |
| 2.2.10 数据处理 | 第45-46页 |
| 第3章 结果与分析 | 第46-65页 |
| 3.1 信号肽酶对地衣芽胞杆菌纳豆激酶分泌的影响 | 第46-49页 |
| 3.1.1 地衣芽胞杆菌信号肽酶基因过表达菌株的构建 | 第46-48页 |
| 3.1.2 过表达信号肽酶对地衣芽胞杆菌分泌纳豆激酶的影响 | 第48-49页 |
| 3.2 信号肽肽酶对地衣芽胞杆菌外源蛋白分泌的影响 | 第49-55页 |
| 3.2.1 地衣芽胞杆菌信号肽肽酶过表达工程菌株的构建 | 第49-50页 |
| 3.2.2 信号肽肽酶过表达对地衣芽胞杆菌胞外总蛋白分泌的影响 | 第50-51页 |
| 3.2.3 信号肽肽酶过表达对地衣芽胞杆菌分泌α-淀粉酶和纳豆激酶的影响 | 第51-55页 |
| 3.3 基于地衣芽胞杆菌DW2转录组数据的启动子的筛选 | 第55-58页 |
| 3.3.1 不同启动子介导的纳豆激酶工程菌株的构建 | 第55-56页 |
| 3.3.2 不同启动子对纳豆激酶表达的影响 | 第56-58页 |
| 3.4 串联启动子表达系统的构建 | 第58-65页 |
| 3.4.1 串联启动子介导的α-淀粉酶,纳豆激酶表达载体的构建 | 第58-59页 |
| 3.4.2 串联启动子对地衣芽胞杆菌中α-淀粉酶,纳豆激酶的表达的影响 | 第59-61页 |
| 3.4.3 P_(ylB)-P43介导下α-淀粉酶,纳豆激酶的相对转录水平 | 第61-65页 |
| 第4章 结论与展望 | 第65-68页 |
| 4.1 结论 | 第65-66页 |
| 4.2 展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 附录 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及申请的专利 | 第75页 |
