| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩写词表 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-32页 |
| 1 研究目的与意义 | 第15页 |
| 2 国内外研究进展 | 第15-30页 |
| 2.1 Myostatin基因研究进展 | 第15-25页 |
| 2.1.1 Myostatin的发现与研究进展 | 第15-17页 |
| 2.1.2 Myostatin基因的分子结构及同源性 | 第17-18页 |
| 2.1.3 Myostatin蛋白的合成及生物学特性 | 第18-21页 |
| 2.1.4 Myostatin的信号通路 | 第21-22页 |
| 2.1.5 Myostatin基因的生物学功能 | 第22-24页 |
| 2.1.6 Myostatin拮抗剂的研究进展 | 第24页 |
| 2.1.7 Myostatin抗体的研究进展 | 第24-25页 |
| 2.2 疫苗研究进展 | 第25-30页 |
| 2.2.1 传统疫苗 | 第26-27页 |
| 2.2.2 核酸疫苗 | 第27-28页 |
| 2.2.3 核酸疫苗的免疫机理 | 第28-29页 |
| 2.2.4 乙肝表面抗原增强免疫原性的研究 | 第29-30页 |
| 3 研究内容与技术路线 | 第30-32页 |
| 第二章 试验研究 | 第32-94页 |
| 试验一 绵羊Myostatin前肽对成肌细胞的分化作用 | 第32-46页 |
| 1 材料与方法 | 第32-38页 |
| 1.1 实验试剂 | 第32-33页 |
| 1.2 慢病毒载体、包装细胞和菌株 | 第33页 |
| 1.3 实验方法 | 第33-38页 |
| 1.3.1 Myostatin前肽过表达慢病毒重组质粒的构建及制备 | 第33-35页 |
| 1.3.2 包装细胞株293T细胞的培养 | 第35-36页 |
| 1.3.3 Myostatin前肽过表达慢病毒的包装 | 第36页 |
| 1.3.4 滴度检测 | 第36-37页 |
| 1.3.5 C2C12细胞培养及转染 | 第37页 |
| 1.3.6 成肌细胞分化诱导及其指标测定 | 第37页 |
| 1.3.7 Westernblot检测蛋白表达 | 第37-38页 |
| 2 结果 | 第38-43页 |
| 2.1 Myostatin前肽克隆 | 第38页 |
| 2.2 Myostatin前肽过表达慢病毒载体的构建和鉴定 | 第38-40页 |
| 2.3 WB检测结果 | 第40页 |
| 2.4 滴度结果 | 第40-41页 |
| 2.5 过表达Myostatin前肽对成肌细胞的分化 | 第41-43页 |
| 2.5.1 免疫荧光检测结果 | 第41-42页 |
| 2.5.2 肌管融合率的测定 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 4 小结 | 第45-46页 |
| 试验二 Myostatin前肽蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第46-54页 |
| 1 材料与方法 | 第46-48页 |
| 1.1 实验材料 | 第46页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第46页 |
| 1.1.2 工具酶和生化试剂 | 第46页 |
| 1.1.3 培养基 | 第46页 |
| 1.2 方法 | 第46-48页 |
| 1.2.1 Myostatin前肽蛋白密码子优化及突变 | 第46-47页 |
| 1.2.2 pPIC9K-Msp重组质粒的构建 | 第47页 |
| 1.2.3 电转化毕赤酵母GS115 | 第47页 |
| 1.2.4 压力筛选 | 第47-48页 |
| 1.2.5 重组酵母转化子的诱导表达 | 第48页 |
| 1.2.6 WesternBlot鉴定Myostatin前肽的表达 | 第48页 |
| 2 结果 | 第48-52页 |
| 2.1 重组质粒pPIC9K-Msp的构建及酶切鉴定 | 第48-49页 |
| 2.2 压力筛选 | 第49-50页 |
| 2.3 重组质粒pPIC9K-Msp的PCR鉴定 | 第50页 |
| 2.4 表达产物SDS-PAGE和Westernblot鉴定 | 第50-52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| 4 小结 | 第53-54页 |
| 试验三 Myostatin前肽蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第54-60页 |
| 1 材料与方法 | 第54-56页 |
| 1.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第54页 |
| 1.1.2 工具酶和生化试剂 | 第54-55页 |
| 1.2 方法 | 第55-56页 |
| 1.2.1 引物的设计 | 第55页 |
| 1.2.2 PCR扩增 | 第55页 |
| 1.2.3 PCR产物胶回收 | 第55-56页 |
| 1.2.4 克隆载体pMD18-M的构建 | 第56页 |
| 1.2.5 重组质粒的构建 | 第56页 |
| 1.2.6 目的蛋白表达 | 第56页 |
| 1.2.7 目的蛋白的纯化 | 第56页 |
| 2 结果 | 第56-58页 |
| 2.1 质粒构建 | 第56-57页 |
| 2.2 绵羊突变型Myostatin前肽蛋白序列的扩增 | 第57-58页 |
| 2.3 蛋白表达产物的分析 | 第58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 4 小结 | 第59-60页 |
| 试验四 Myostatin前肽蛋白对羔羊肌肉生长的影响 | 第60-72页 |
| 1 材料与方法 | 第60-65页 |
| 1.1 试验动物选择 | 第60页 |
| 1.2 试验时间地点 | 第60页 |
| 1.3 实验方法 | 第60-65页 |
| 1.3.1 实验设计 | 第60-61页 |
| 1.3.2 屠宰实验 | 第61页 |
| 1.3.3 测定指标 | 第61页 |
| 1.3.4 采集样品 | 第61页 |
| 1.3.5 HE染色切片制作程序 | 第61-62页 |
| 1.3.6 荧光定量PCR | 第62-64页 |
| 1.3.7 数据处理与统计分析 | 第64-65页 |
| 2 实验结果 | 第65-69页 |
| 2.1 注射Myostatin前肽重组蛋白对羔羊肌肉生长的作用 | 第65-66页 |
| 2.2 利用Myostatin前肽重组蛋白动物模型,研究肌肉纤维增大的生理和分子机制 | 第66-68页 |
| 2.3 注射Myostatin前肽后对Myostatin信号通路下游及相关基因的影响 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-70页 |
| 4 小结 | 第70-72页 |
| 试验五 Myostatin成熟肽核酸疫苗的制备及对小鼠肌肉生长的影响 | 第72-84页 |
| 1 材料与方法 | 第72-76页 |
| 1.1 实验材料 | 第72-73页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第72-73页 |
| 1.1.2 工具酶和生化试剂 | 第73页 |
| 1.2 实验方法 | 第73-76页 |
| 1.2.1 细菌基因组DNA的提取 | 第73页 |
| 1.2.2 核酸疫苗pV-SM的构建 | 第73-74页 |
| 1.2.3 质粒的大量培养及抽提纯化 | 第74页 |
| 1.2.4 实验动物的选择 | 第74页 |
| 1.2.5 免疫方法 | 第74页 |
| 1.2.6 样品采集 | 第74-75页 |
| 1.2.7 组织切片 | 第75页 |
| 1.2.8 荧光定量PCR | 第75页 |
| 1.2.9 抗体检测 | 第75页 |
| 1.2.10 数据处理与统计分析 | 第75-76页 |
| 2 实验结果 | 第76-81页 |
| 2.1 Myostatin成熟肽核酸疫苗的制备 | 第76页 |
| 2.2 免疫Myostatin成熟肽核酸疫苗后对实验小鼠体重的影响 | 第76-77页 |
| 2.3 免疫Myostatin成熟肽核酸疫苗后对实验小鼠肌纤维的影响 | 第77-78页 |
| 2.4 免疫小鼠抗血清的检测 | 第78-79页 |
| 2.5 免疫Myostatin成熟肽核酸疫苗后对小鼠Myostatin信号通路下游相关基因影响 | 第79-81页 |
| 3 讨论 | 第81-82页 |
| 3.1 对BALB/c小鼠肌肉生长的影响 | 第81页 |
| 3.2 Myostatin成熟肽核酸疫苗产生免疫应答的机制 | 第81-82页 |
| 4 小结 | 第82-84页 |
| 试验六 Myostatin成熟肽核酸疫苗对羔羊肌肉生长的影响 | 第84-94页 |
| 1 材料与方法 | 第84-86页 |
| 1.1 实验材料 | 第84页 |
| 1.2 实验方法 | 第84-86页 |
| 1.2.1 试验动物的选择 | 第84页 |
| 1.2.2 免疫方法 | 第84-85页 |
| 1.2.3 屠宰实验 | 第85页 |
| 1.2.4 测定指标 | 第85页 |
| 1.2.5 采集样品 | 第85页 |
| 1.2.6 组织切片 | 第85页 |
| 1.2.7 荧光定量PCR | 第85页 |
| 1.2.8 抗体检测 | 第85-86页 |
| 1.2.9 数据处理与统计分析 | 第86页 |
| 2 实验结果 | 第86-91页 |
| 2.1 免疫Myostatin成熟肽核酸疫苗后对实验羔羊体重的影响 | 第86-87页 |
| 2.2 免疫Myostatin核酸疫苗后对实验羔羊肌纤维的影响 | 第87-88页 |
| 2.3 免疫羔羊抗血清的检测 | 第88-89页 |
| 2.4 免疫Myostatin成熟肽核酸疫苗后对羔羊Myostatin信号通路下游相关基因影响 | 第89-91页 |
| 3 讨论 | 第91-93页 |
| 3.1 载体的选择 | 第91页 |
| 3.2 试验动物的选择 | 第91页 |
| 3.3 对羔羊肌肉生长的影响 | 第91-93页 |
| 4 小结 | 第93-94页 |
| 第三章 结论 | 第94-95页 |
| 第四章 论文创新点 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-102页 |
| 附录1 主要仪器设备 | 第102-103页 |
| 附录2 溶液及培养基配置 | 第103-105页 |
| 作者简介 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 石河子大学博士研究生学位论文导师评阅表 | 第108页 |
