| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第1章 前言 | 第16-37页 |
| 1.1 甾体与甾体药物 | 第16-17页 |
| 1.1.1 甾体化合物 | 第16页 |
| 1.1.2 甾体药物及临床应用 | 第16-17页 |
| 1.2 甾体药物的合成 | 第17-26页 |
| 1.2.1 甾体药物直接合成 | 第18-19页 |
| 1.2.2 甾体药物的间接合成 | 第19-20页 |
| 1.2.3 甾体药物中间体 | 第20-22页 |
| 1.2.4 甾体药物中间体制备方法 | 第22-24页 |
| 1.2.5 生物法合成甾体药物中间体反应类型 | 第24-26页 |
| 1.3 甾体药物中间体研究现状 | 第26页 |
| 1.4 生物学背景 | 第26-27页 |
| 1.5 甾体药物中间体研究难点与问题 | 第27-29页 |
| 1.5.1 菌株活性低 | 第27页 |
| 1.5.2 甾体化合物的低溶解度及抑制性 | 第27-28页 |
| 1.5.3 甾核氧化与甾核降解 | 第28-29页 |
| 1.6 甾体药物中间体国内外进展 | 第29-34页 |
| 1.6.1 生产的原材料或底物 | 第29页 |
| 1.6.2 甾体母核的保护 | 第29-30页 |
| 1.6.3 高产菌株的选育和提高 | 第30页 |
| 1.6.4 反应体系的改进 | 第30-33页 |
| 1.6.5 细胞通透性研究 | 第33页 |
| 1.6.6 未来前景 | 第33-34页 |
| 1.7 本课题依据、目的及意义 | 第34-37页 |
| 1.7.1 研究目的 | 第34-35页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第35页 |
| 1.7.3 理论意义和实际应用价值 | 第35-37页 |
| 第2章 不同分枝杆菌转化植物甾醇产甾体药物中间体代谢过程分析 | 第37-49页 |
| 2.1 引言 | 第37页 |
| 2.2 简要实验路线 | 第37页 |
| 2.3 材料和方法 | 第37-40页 |
| 2.3.1 菌株和培养基 | 第37-38页 |
| 2.3.2 试剂和仪器 | 第38页 |
| 2.3.3 植物甾醇-吐温80母液制备 | 第38页 |
| 2.3.4 植物甾醇的生物转化流程 | 第38-39页 |
| 2.3.5 分析方法 | 第39-40页 |
| 2.4 结果和讨论 | 第40-48页 |
| 2.4.1 甾体药物中间体的TLC结果 | 第40页 |
| 2.4.2 甾体药物中间体HPLC定量 | 第40-43页 |
| 2.4.3 各菌株甾醇转化代谢途径分析 | 第43-48页 |
| 2.5 小结 | 第48-49页 |
| 第3章 分枝杆菌NwIB-yV转化植物甾醇产9-OH-AD的培养基优化 | 第49-62页 |
| 3.1 引言 | 第49页 |
| 3.2 简要实验路线 | 第49页 |
| 3.3 材料和方法 | 第49-52页 |
| 3.3.1 菌株与培养基 | 第49-50页 |
| 3.3.2 试剂与仪器 | 第50页 |
| 3.3.3 植物甾醇-吐温80母液制备 | 第50页 |
| 3.3.4 植物甾醇的生物转化流程 | 第50页 |
| 3.3.5 碳源优化 | 第50-51页 |
| 3.3.6 氮源优化 | 第51页 |
| 3.3.7 pH的影响 | 第51页 |
| 3.3.8 正交试验设计 | 第51页 |
| 3.3.9 葡萄糖酸钠的作用 | 第51页 |
| 3.3.10 分析方法 | 第51-52页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第52-60页 |
| 3.4.1 碳源优化 | 第52-53页 |
| 3.4.2 不同葡萄糖浓度的影响 | 第53页 |
| 3.4.3 碳源对pH的影响 | 第53-55页 |
| 3.4.4 加入不同的额外碳源 | 第55-56页 |
| 3.4.5 氮源的优化 | 第56-57页 |
| 3.4.6 pH因素探讨 | 第57-58页 |
| 3.4.7 正交实验 | 第58-59页 |
| 3.4.8 优化培养基对比 | 第59-60页 |
| 3.4.9 葡萄糖酸钠的作用 | 第60页 |
| 3.5 小结 | 第60-62页 |
| 第4章 油水乳化体系中转化植物甾醇产9-OH-AD | 第62-79页 |
| 4.1 引言 | 第62页 |
| 4.2 简要实验路线 | 第62-63页 |
| 4.3 材料和方法 | 第63-67页 |
| 4.3.1 菌株和培养基 | 第63页 |
| 4.3.2 试剂和仪器 | 第63页 |
| 4.3.3 植物甾醇-吐温80母液的制备 | 第63-64页 |
| 4.3.4 植物甾醇在水相体系中的生物转化 | 第64页 |
| 4.3.5 植物甾醇在油水乳化体系中的生物转化 | 第64页 |
| 4.3.6 生物量测定方法 | 第64页 |
| 4.3.7 各种甾体物质在各相中的分布 | 第64-65页 |
| 4.3.8 分离纯化过程——萃取 | 第65页 |
| 4.3.9 分离纯化过程——除水溶性杂质 | 第65页 |
| 4.3.10 分离纯化过程——除油 | 第65-66页 |
| 4.3.11 分离纯化过程——除残留植物甾醇 | 第66页 |
| 4.3.12 分离纯化过程——柱层析 | 第66-67页 |
| 4.3.13 分离纯化过程——结晶法 | 第67页 |
| 4.3.14 分析方法 | 第67页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第67-77页 |
| 4.4.1 植物甾醇在水相体系中的转化 | 第67-69页 |
| 4.4.2 植物甾醇在油水体系中的转化 | 第69-71页 |
| 4.4.3 油水乳化体系的形成要素和特点 | 第71-72页 |
| 4.4.4 产物及副产物分布情况 | 第72-74页 |
| 4.4.5 分离纯化过程——萃取 | 第74-75页 |
| 4.4.6 分离纯化过程—除油 | 第75-76页 |
| 4.4.7 除去剩余底物过程 | 第76页 |
| 4.4.8 柱层析结果 | 第76-77页 |
| 4.4.9 结晶分离纯化法 | 第77页 |
| 4.5 小结 | 第77-79页 |
| 第5章 不同助溶剂与辅酶对植物甾醇转化代谢过程的影响 | 第79-99页 |
| 5.1 引言 | 第79页 |
| 5.2 简要实验路线 | 第79-80页 |
| 5.3 材料和方法 | 第80-83页 |
| 5.3.1 菌株和培养基 | 第80页 |
| 5.3.2 试剂 | 第80页 |
| 5.3.3 新金分枝杆菌NwIB-yV在含环糊精体系中的生物转化 | 第80-81页 |
| 5.3.4 新金分枝杆菌NwIB-01MS_(ChoM2)在含吐温80和环糊精体系中的甾醇转化 | 第81-82页 |
| 5.3.5 辅酶及其再生对新金分枝杆菌NwIB-yV甾醇转化的影响 | 第82-83页 |
| 5.3.6 辅酶及其再生对新金分枝杆菌NwIB-R10_(ChoM2)甾醇转化的影响 | 第83页 |
| 5.3.7 分析方法 | 第83页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第83-97页 |
| 5.4.1 新金分枝杆菌NwIB-yV在含环糊精体系中的甾醇转化 | 第83-88页 |
| 5.4.2 吐温80和环糊精对于新金分枝杆菌NwIB-01MS_(ChoM2)甾醇转化的影响 | 第88-91页 |
| 5.4.3 辅酶与辅酶再生对于新金分枝杆菌NwIB-yV甾醇转化的影响 | 第91-96页 |
| 5.4.4 辅酶与辅酶再生对于新金分枝杆菌NwIB-R10_(ChoM2)甾醇转化的影响 | 第96-97页 |
| 5.5 小结 | 第97-99页 |
| 第6章 高效静息细胞转化体系转化植物甾醇产甾体药物中间体的研究 | 第99-119页 |
| 6.1 引言 | 第99-100页 |
| 6.2 简要实验路线 | 第100页 |
| 6.3 材料和方法 | 第100-104页 |
| 6.3.1 菌株和培养基 | 第100页 |
| 6.3.2 试剂 | 第100-101页 |
| 6.3.3 菌体培养与收集 | 第101页 |
| 6.3.4 植物甾醇母液配制 | 第101页 |
| 6.3.5 植物甾醇转化过程 | 第101页 |
| 6.3.6 β-CD和静息细胞转化 | 第101页 |
| 6.3.7 HP-β-CD与静息细胞转化 | 第101-102页 |
| 6.3.8 底物抑制曲线 | 第102页 |
| 6.3.9 菌体生长时间对植物甾醇转化效率的影响 | 第102页 |
| 6.3.10 菌体培养植物甾醇的诱导浓度对植物甾醇转化效率的影响 | 第102页 |
| 6.3.11 缓冲体系选择对植物甾醇转化效率的影响 | 第102-103页 |
| 6.3.12 缓冲体系浓度对植物甾醇转化效率的影响 | 第103页 |
| 6.3.13 缓冲体系pH对植物甾醇转化效率的影响 | 第103页 |
| 6.3.14 HP-β-CD与植物甾醇摩尔比对转化效率的影响 | 第103页 |
| 6.3.15 菌体的重复使用 | 第103页 |
| 6.3.16 HP-β-CD的重复使用 | 第103页 |
| 6.3.17 不同菌体浓度和甾醇浓度的多水平分析 | 第103页 |
| 6.3.18 分批补料静息细胞转化方法 | 第103-104页 |
| 6.3.19 发酵罐应用实例 | 第104页 |
| 6.3.20 在其它菌株中的使用 | 第104页 |
| 6.3.21 分析方法 | 第104页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第104-118页 |
| 6.4.1 含有β-CD或HP-β-CD的静息细胞转化 | 第104-105页 |
| 6.4.2 HP-β-CD与静息细胞转化、生长细胞转化 | 第105-106页 |
| 6.4.3 菌体培养时间对植物甾醇转化效率的影响 | 第106-107页 |
| 6.4.4 植物甾醇的诱导浓度对植物甾醇转化效率的影响 | 第107-108页 |
| 6.4.5 缓冲体系的选择对植物甾醇转化效率的影响 | 第108-109页 |
| 6.4.6 缓冲体系的pH值对植物甾醇转化效率的影响 | 第109页 |
| 6.4.7 缓冲体系的浓度对植物甾醇转化效率的影响 | 第109页 |
| 6.4.8 HP-β-CD与植物甾醇的摩尔比对甾醇转化效率的影响 | 第109-111页 |
| 6.4.9 静息细胞转化体系的产物组分分析 | 第111页 |
| 6.4.10 菌体的重复使用 | 第111-112页 |
| 6.4.11 HP-β-CD的重复使用 | 第112页 |
| 6.4.12 菌体浓度与甾醇浓度的多水平分析 | 第112-113页 |
| 6.4.13 底物抑制曲线 | 第113页 |
| 6.4.14 分批补料转化 | 第113-114页 |
| 6.4.15 发酵罐转化的泡沫问题 | 第114-116页 |
| 6.4.16 其它菌株的生物转化 | 第116-118页 |
| 6.5 小结 | 第118-119页 |
| 第7章 溶氧水平对植物甾醇转化的影响 | 第119-128页 |
| 7.1 引言 | 第119页 |
| 7.2 简要实验路线 | 第119页 |
| 7.3 材料和方法 | 第119-121页 |
| 7.3.1 菌株和培养基 | 第119-120页 |
| 7.3.2 试剂 | 第120页 |
| 7.3.3 生长细胞中植物留醇转化流程 | 第120页 |
| 7.3.4 静息细胞中植物甾醇转化流程 | 第120页 |
| 7.3.5 不同的摇床转速对9-OH-AD产率的影响 | 第120-121页 |
| 7.3.6 不同的摇瓶液装量对9-OH-AD产率的影响 | 第121页 |
| 7.3.7 不同的阶段供氧对9-OH-AD产率的影响 | 第121页 |
| 7.3.8 分析方法 | 第121页 |
| 7.4 结果与讨论 | 第121-127页 |
| 7.4.1 不同摇床转速对9-OH-AD生成初速度和生成曲线的影响 | 第121页 |
| 7.4.2 不同摇瓶装液量对9-OH-AD生成的初速度和生成曲线的影响 | 第121-123页 |
| 7.4.3 不同溶氧条件下对9-OH-AD与AD的比值的影响 | 第123-124页 |
| 7.4.4 新金分枝杆菌NwIB-yV中的AD生成途径 | 第124-126页 |
| 7.4.5 AD途径与9-OH-AD途径的分配 | 第126-127页 |
| 7.5 小结 | 第127-128页 |
| 第8章 结论与展望 | 第128-134页 |
| 8.1 结论 | 第128-131页 |
| 8.2 展望与下一步工作 | 第131-134页 |
| 参考文献 | 第134-150页 |
| 致谢 | 第150-151页 |
| 博士期间发表的论文和专利 | 第151-152页 |
| 附录一 | 第152页 |
