| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第18-30页 |
| 1.1. 引言 | 第18页 |
| 1.2. 癌症的特点 | 第18-21页 |
| 1.2.1. 乳头状甲状腺癌 | 第19-20页 |
| 1.2.2. 肝细胞癌 | 第20-21页 |
| 1.3. 测序技术的发展 | 第21-23页 |
| 1.3.1. 第一代测序技术 | 第21页 |
| 1.3.2. 第二代测序技术 | 第21-22页 |
| 1.3.3. 第三代测序技术 | 第22-23页 |
| 1.4. 非编码RNA | 第23-25页 |
| 1.4.1. 短链非编码NA | 第23-24页 |
| 1.4.2. 长链非编码RNA | 第24-25页 |
| 1.5. 表观遗传修饰 | 第25-26页 |
| 1.5.1. lncRNA影响的表观遗传学修饰 | 第25-26页 |
| 1.6. LNCRNA的递送与应用前景 | 第26-29页 |
| 1.6.1. 利用非病毒类基因递送系统递送lncRNA | 第27-28页 |
| 1.6.2. lncRNA的应用前景 | 第28-29页 |
| 1.7. 展望 | 第29-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-65页 |
| 2.1. 研究设计与研究对象 | 第30-31页 |
| 2.2. 主要实验仪器 | 第31-32页 |
| 2.3. 主要实验耗材 | 第32-33页 |
| 2.4. 主要实验试剂 | 第33-34页 |
| 2.5. 遗传物质的提取 | 第34-38页 |
| 2.5.1. 组织研磨 | 第34页 |
| 2.5.2. 组织全基因组DNA提取 | 第34-35页 |
| 2.5.3. 外周血全基因组DNA提取 | 第35-36页 |
| 2.5.4. RNA的提取 | 第36页 |
| 2.5.5. 菌体扩增和质粒的提取 | 第36-38页 |
| 2.6. 全外显子组测序与SANGER测序验证 | 第38-41页 |
| 2.6.1. 全外显子组测序 | 第38-40页 |
| 2.6.2. Sanger测序 | 第40-41页 |
| 2.7. 分子生物学实验 | 第41-45页 |
| 2.7.1. 聚合酶链式反应(PCR) | 第41-43页 |
| 2.7.2. 琼脂糖凝胶电泳 | 第43页 |
| 2.7.3. 转录组RNA逆转录成cDNA | 第43-44页 |
| 2.7.4. 荧光定量PCR测定基因表达 | 第44-45页 |
| 2.8. 细胞基础培养 | 第45-46页 |
| 2.8.1. 细胞复苏 | 第45页 |
| 2.8.2. 细胞传代 | 第45-46页 |
| 2.8.3. 细胞冻存 | 第46页 |
| 2.9. 瞬时转染基因的敲低或过表达 | 第46-49页 |
| 2.9.1. siRNA的转染 | 第47页 |
| 2.9.2. 过表达载体质粒转染 | 第47-49页 |
| 2.10. 细胞功能实验 | 第49-52页 |
| 2.10.1. 台盼蓝细胞生长计数实验 | 第49页 |
| 2.10.2. 平板克隆集落形成实验 | 第49-50页 |
| 2.10.3. 细胞周期测定 | 第50页 |
| 2.10.4. 细胞凋亡测定 | 第50-51页 |
| 2.10.5. 细胞划痕实验 | 第51页 |
| 2.10.6. Transwell侵袭实验 | 第51-52页 |
| 2.10.7. 核质分离实验 | 第52页 |
| 2.11. 蛋白质免疫印迹 | 第52-54页 |
| 2.12. SEQUENOM质谱法测DNA甲基化 | 第54-55页 |
| 2.13. 染色质免疫共沉淀 | 第55-59页 |
| 2.13.1. 交联与水解 | 第57页 |
| 2.13.2. 超声 | 第57页 |
| 2.13.3. 蛋白质/DNA免疫沉淀 | 第57-58页 |
| 2.13.4. 洗脱蛋白质/DNA复合体 | 第58页 |
| 2.13.5. 解交联 | 第58页 |
| 2.13.6. DNA纯化 | 第58页 |
| 2.13.7. 实时荧光定量PCR | 第58-59页 |
| 2.14. RNA-蛋白质免疫共沉淀 | 第59-62页 |
| 2.15. 裸鼠体内成瘤实验 | 第62-65页 |
| 2.15.1. 小鼠荷瘤实验 | 第62-63页 |
| 2.15.2. 石蜡组织包埋 | 第63页 |
| 2.15.3. HE染色实验 | 第63页 |
| 2.15.4. 免疫组化实验 | 第63-65页 |
| 第三章 实验结果 | 第65-112页 |
| 3.1. 全外显子测序鉴定乳头状甲状腺癌的驱动基因 | 第65-85页 |
| 3.1.1. 乳头状甲状腺癌突变特征 | 第65-71页 |
| 3.1.2. 与甲状腺癌相关的体细胞突变基因 | 第71-73页 |
| 3.1.3. 长链非编码RNA GAS8-AS1甲状腺癌驱动突变基因 | 第73-79页 |
| 3.1.4. 跨膜蛋白LPAR4的突变会影响中国人群甲状腺癌发生 | 第79-83页 |
| 3.1.5. 细胞通路变化分析 | 第83-84页 |
| 3.1.6. 小结 | 第84-85页 |
| 3.2. 长链非编码RNA GAS8-AS1的调控机制研究 | 第85-112页 |
| 3.2.1. 肝细胞癌组织中GAS8-AS1与GAS8表达的相关性 | 第85-90页 |
| 3.2.2. GAS8-AS1和GAS8能够抑制肝癌细胞的增殖 | 第90-92页 |
| 3.2.3. 通过索拉菲尼用药GAS8-AS1和GAS8能够促进肝癌细胞的凋亡 | 第92-98页 |
| 3.2.4. GAS8-AS1和GAS8能够抑制肝细胞癌的侵袭转移 | 第98-99页 |
| 3.2.5. lncRNA GAS8-AS1通过表观遗传学修饰调控GAS8表达 | 第99-108页 |
| 3.2.6. lncRNA GAS8和GAS8基因的小鼠荷瘤实验 | 第108-110页 |
| 3.2.7. 小结 | 第110-112页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第112-114页 |
| 附录 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 研究成果及已发表的学术论文 | 第124-125页 |
| 作者及导师简介 | 第125-127页 |
| 附件 | 第127-128页 |
