| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-24页 |
| 1.1 粪类圆线虫 | 第13-16页 |
| 1.1.1 粪类圆线虫概述 | 第13页 |
| 1.1.2 粪类圆线虫的生活史 | 第13-14页 |
| 1.1.3 粪类圆线虫的流行病学 | 第14-15页 |
| 1.1.4 粪类圆线虫的发病机理及临床表现 | 第15页 |
| 1.1.5 粪类圆线虫的诊断与治疗 | 第15-16页 |
| 1.2 秀丽隐杆线虫 | 第16-19页 |
| 1.2.1 秀丽隐杆线虫概述 | 第16-17页 |
| 1.2.2 秀丽隐杆线虫的生殖细胞发育 | 第17-18页 |
| 1.2.3 秀丽隐杆线虫的阴门发育过程 | 第18-19页 |
| 1.3 RIOK-2蛋白激酶的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.4 线虫中重要的基因功能研究方法 | 第20-24页 |
| 1.4.1 转基因技术在线虫中的应用 | 第20-22页 |
| 1.4.2 RNAi技术在线虫中的应用 | 第22-24页 |
| 2 研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 3 材料与方法 | 第25-51页 |
| 3.1 试验材料 | 第25-28页 |
| 3.1.1 实验动物及实验用菌株 | 第25页 |
| 3.1.2 菌种与质粒 | 第25页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第25-26页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第26页 |
| 3.1.5 主要试剂的配制 | 第26-28页 |
| 3.1.5.1 抗生素与培养基的配制 | 第26-27页 |
| 3.1.5.2 碱裂解法质粒提取缓冲液的配制 | 第27页 |
| 3.1.5.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液 | 第27-28页 |
| 3.1.5.4 Western blot缓冲液 | 第28页 |
| 3.1.5.5 线虫收集用缓冲液 | 第28页 |
| 3.1.5.6 DAPI溶液的配制 | 第28页 |
| 3.2 试验方法 | 第28-51页 |
| 3.2.1 粪类圆线虫各阶段虫体的收集及保种 | 第28-29页 |
| 3.2.2 引物的设计与合成 | 第29-30页 |
| 3.2.3 粪类圆线虫DNA的提取 | 第30页 |
| 3.2.4 粪类圆线虫RNA的提取 | 第30-31页 |
| 3.2.5 粪类圆线虫Ss-riok-2基因全长cDNA序列的获得 | 第31-35页 |
| 3.2.5.1 粪类圆线虫Ss-riok-2基因全长cDNA序列的扩增 | 第31-32页 |
| 3.2.5.2 PCR产物的凝胶检测 | 第32页 |
| 3.2.5.3 PCR产物的凝胶纯化回收 | 第32-33页 |
| 3.2.5.4 目的DNA连接pMD19-T载体 | 第33页 |
| 3.2.5.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| 3.2.5.6 连接产物的转化 | 第34页 |
| 3.2.5.7 菌液PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.6 粪类圆线虫Ss-riok-2基因全长gDNA序列的获得 | 第35页 |
| 3.2.7 生物信息学分析 | 第35-36页 |
| 3.2.8 粪类圆线虫Ss-RIOK-2重组蛋白原核表达质粒的构建 | 第36-38页 |
| 3.2.9 粪类圆线虫Ss-RIOK-2重组蛋白的原核表达 | 第38页 |
| 3.2.10 粪类圆线虫Ss-RIOK-2重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第38页 |
| 3.2.11 粪类圆线虫Ss-RIOK-2重组蛋白的大量表达与纯化 | 第38-40页 |
| 3.2.12 粪类圆线虫Ss-RIOK-2重组蛋白的Western-Blot分析 | 第40页 |
| 3.2.13 粪类圆线虫Ss-RIOK-2重组蛋白的自我磷酸化分析 | 第40-41页 |
| 3.2.14 秀丽隐杆线虫和粪类圆线虫转基因质粒的构建 | 第41-44页 |
| 3.2.14.1 秀丽隐杆线虫Ce-riok-2基因启动子序列的获得 | 第41-42页 |
| 3.2.14.2 秀丽隐杆线虫Ce-riok-2基因cDNA序列的获得 | 第42页 |
| 3.2.14.3 秀丽隐杆线虫Ce-riok-2基因过表达转基因质粒的构建 | 第42-43页 |
| 3.2.14.4 粪类圆线虫Ss-riok-2基因启动子序列的获得 | 第43-44页 |
| 3.2.15 秀丽隐杆线虫和粪类圆线虫的转基因实验 | 第44-46页 |
| 3.2.15.1 转基因实验方法 | 第44-45页 |
| 3.2.15.2 转基因后代的观察 | 第45-46页 |
| 3.2.16 秀丽隐杆线虫Ce-riok-2基因的RNAi实验 | 第46-48页 |
| 3.2.16.1 秀丽隐杆线虫Ce-riok-2基因RNAi质粒的构建 | 第46-47页 |
| 3.2.16.2 秀丽隐杆线虫的同步化处理 | 第47-48页 |
| 3.2.16.3 饲喂法进行秀丽隐杆线虫RNAi实验 | 第48页 |
| 3.2.17 秀丽隐杆线虫性腺分离及DAPI染色 | 第48-49页 |
| 3.2.18 Reverse transcription (RT)-PCR | 第49页 |
| 3.2.19 荧光定量PCR | 第49-50页 |
| 3.2.20 统计学分析 | 第50-51页 |
| 4 结果与分析 | 第51-74页 |
| 4.1 粪类圆线虫各个时期虫体的形态学观察 | 第51-52页 |
| 4.2 粪类圆线虫Ss-riok-2基因的cDNA序列获得 | 第52-53页 |
| 4.3 粪类圆线虫Ss-riok-2基因的gDNA序列获得 | 第53页 |
| 4.4 粪类圆线虫Ss-riok-2基因的生物信息学分析 | 第53-56页 |
| 4.4.1 粪类圆线虫Ss-riok-2基因的基因结构分析 | 第53-54页 |
| 4.4.2 粪类圆线虫Ss-riok-2基因的氨基酸比对分析 | 第54-55页 |
| 4.4.3 粪类圆线虫Ss-RIOK-2蛋白的氨基酸进化树分析 | 第55-56页 |
| 4.5 粪类圆线虫Ss-RIOK-2蛋白的蛋白结构分析 | 第56-59页 |
| 4.6 粪类圆线虫Ss-RIOK-2蛋白的原核表达与纯化 | 第59-60页 |
| 4.6.1 粪类圆线虫Ss-RIOK-2蛋白的原核表达质粒构建 | 第59页 |
| 4.6.2 粪类圆线虫Ss-RIOK-2蛋白的原核表达 | 第59-60页 |
| 4.7 粪类圆线虫Ss-RIOK-2自我磷酸化作用 | 第60-61页 |
| 4.8 粪类圆线虫Ss-riok-2基因的转录组分析 | 第61-62页 |
| 4.9 粪类圆线虫和秀丽隐杆线虫的转基因实验 | 第62-66页 |
| 4.9.1 粪类圆线虫的Ss-riok-2基因启动子序列的获得 | 第62-63页 |
| 4.9.2 秀丽隐杆线虫的Ce-riok-2基因启动子序列的获得 | 第63页 |
| 4.9.3 粪类圆线虫Ss-riok-2基因和秀丽隐杆线虫Ce-riok-2基因的启动子序列比对分析 | 第63-65页 |
| 4.9.4 粪类圆线虫和秀丽隐杆线虫转基因质粒的构建 | 第65-66页 |
| 4.10 粪类圆线虫Ss-riok-2基因的表达谱 | 第66-67页 |
| 4.11 秀丽隐杆线虫Ce-riok-2基因的表达谱 | 第67-68页 |
| 4.12 秀丽隐杆线虫Ce-riok-2基因的过表达 | 第68-69页 |
| 4.13 秀丽隐杆线虫Ce-riok-2基因在性腺组织中转录 | 第69-70页 |
| 4.14 秀丽隐杆线虫Ce-riok-2基因的RNAi实验 | 第70-74页 |
| 4.14.1 秀丽隐杆线虫Ce-riok-2基因的RNAi实验的质粒构建 | 第70-71页 |
| 4.14.2 秀丽隐杆线虫Ce-riok-2基因的沉默导致幼虫生长发育缓慢 | 第71页 |
| 4.14.3 秀丽隐杆线虫Ce-riok-2基因的沉默导致成虫不育、阴门突出 | 第71-72页 |
| 4.14.4 秀丽隐杆线虫Ce-riok-2基因的沉默导致性腺细胞数量减少和细胞大小紊乱 | 第72-73页 |
| 4.14.5 秀丽隐杆线虫Ce-riok-2基因的沉默导致秀丽隐杆线虫Ce-vit-2基因转录水平上调 | 第73-74页 |
| 5.讨论 | 第74-81页 |
| 5.1 粪类圆线虫Ss-RIOK-2蛋白激酶的序列特征分析 | 第74-75页 |
| 5.2 粪类圆线虫Ss-RIOK-2蛋白激酶编码基因Ss-riok-2的基因组结构分析 | 第75-76页 |
| 5.3 粪类圆线虫Ss-riok-2基因的转录组分析 | 第76-77页 |
| 5.4 粪类圆线虫Ss-RIOK-2蛋白的表达分析 | 第77页 |
| 5.5 秀丽隐杆线虫Ce-RIOK-2蛋白的表达分析 | 第77-78页 |
| 5.6 Ce-RIOK-2蛋白在秀丽隐杆线虫生殖系统中的作用 | 第78-81页 |
| 总结 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-96页 |
| 附录1 | 第96-99页 |
| 附录2 | 第99-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
