| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 DNA甲基化胞嘧啶研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 DNA甲基化胞嘧啶简介 | 第12页 |
| 1.1.2 DNA甲基化胞嘧啶研究方法 | 第12-13页 |
| 1.1.3 真核生物全基因组甲基化图谱分布特点 | 第13-14页 |
| 1.1.4 DNA甲基化胞嘧啶生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.2 DNA甲基化转移酶研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.1 DNA甲基化转移酶分类 | 第15页 |
| 1.2.2 DNA甲基化转移酶结构及作用机制 | 第15-16页 |
| 1.2.3 DNA甲基化转移酶生物学功能 | 第16页 |
| 1.3 甲基DNA结合蛋白研究进展 | 第16-20页 |
| 1.3.1 甲基DNA结合蛋白家族分类 | 第16-17页 |
| 1.3.2 MBD蛋白家族成员简介 | 第17-18页 |
| 1.3.3 MBD蛋白生物学功能 | 第18-20页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 赤拟谷盗不同生命发育时期全基因组甲基化图谱鉴定及分析 | 第22-46页 |
| 2.1 前言 | 第22-23页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.2.2 实验药品与试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.3.1 基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.3.2 BS-seq数据库的构建 | 第25-26页 |
| 2.3.3 测序数据信息学分析 | 第26页 |
| 2.3.4 甲基化胞嘧啶及甲基化区域(MR)的确定 | 第26-27页 |
| 2.3.5 总RNA提取,纯化及质量检测 | 第27页 |
| 2.3.6 RNA-seq数据库建立及测序 | 第27-28页 |
| 2.3.7 不同甲基化区域(DMR)的确定 | 第28页 |
| 2.3.8 甲基化胞嘧啶的验证 | 第28-30页 |
| 2.4 结果与分析 | 第30-44页 |
| 2.4.1 赤拟谷盗不同生命发育时期甲基化胞嘧啶检测 | 第30-31页 |
| 2.4.2 赤拟谷盗DNA甲基化胞嘧啶水平及分布特点 | 第31-32页 |
| 2.4.3 赤拟谷盗DNA甲基化胞嘧啶富集基因间区远离基因主体区域分布 | 第32-34页 |
| 2.4.4 甲基化胞嘧啶集中分布在内含子区域 | 第34-35页 |
| 2.4.5 重复子序列发生高度甲基化 | 第35-37页 |
| 2.4.6 赤拟谷盗DNA甲基化对基因表达的调控 | 第37-38页 |
| 2.4.7 赤拟谷盗不同生命发育时期不同甲基化区域的鉴定 | 第38-41页 |
| 2.4.8 赤拟谷盗对称分布的CpG甲基化位点分布情况 | 第41-42页 |
| 2.4.9 赤拟谷盗DNA甲基化胞嘧啶位点的验证 | 第42-44页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 赤拟谷盗DNA甲基化转移酶功能研究 | 第46-85页 |
| 3.1 前言 | 第46-47页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第47-49页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第47页 |
| 3.2.2 实验药品与试剂 | 第47-49页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-68页 |
| 3.3.1 赤拟谷盗DNA甲基化转移酶鉴定及全长克隆 | 第49-53页 |
| 3.3.2 不同物种DNA甲基化转移酶蛋白序列分析 | 第53-54页 |
| 3.3.3 qRT-PCR鉴定赤拟谷盗甲基化转移酶基因时空表达模式 | 第54-55页 |
| 3.3.4 赤拟谷盗DNA甲基化转移酶RNAi分析 | 第55-58页 |
| 3.3.5 赤拟谷盗甲基化转移酶体外重组蛋白表达与纯化 | 第58-62页 |
| 3.3.6 电泳凝胶迁移率实验 | 第62-64页 |
| 3.3.7 BSP法检测赤拟谷盗体内CpG甲基化水平变化 | 第64-68页 |
| 3.4 结果与分析 | 第68-82页 |
| 3.4.1 赤拟谷盗DNA甲基化转移酶基因的鉴定及序列分析 | 第68-74页 |
| 3.4.2 赤拟谷盗甲基化转移酶基因时空表达模式 | 第74-76页 |
| 3.4.3 赤拟谷盗DNA甲基化转移酶对不同底物结合能力 | 第76-78页 |
| 3.4.4 赤拟谷盗DNA甲基化转移酶催化活力检测 | 第78-80页 |
| 3.4.5 赤拟谷盗DNA甲基化转移酶基因RNAi分析 | 第80-82页 |
| 3.4.6 甲基化转移酶基因敲减后对CpG甲基化水平的影响 | 第82页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第82-85页 |
| 第四章 赤拟谷盗甲基DNA结合蛋白功能研究 | 第85-111页 |
| 4.1 前言 | 第85-86页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第86页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第86页 |
| 4.2.2 实验药品与试剂 | 第86页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第86页 |
| 4.3 实验方法 | 第86-101页 |
| 4.3.1 Tcmbd2/3基因的鉴定及全长克隆 | 第86-90页 |
| 4.3.2 不同物种MBD蛋白序列分析 | 第90-91页 |
| 4.3.3 qRT-PCR鉴定赤拟谷盗Tcmbd2/3基因时空表达模式 | 第91-92页 |
| 4.3.4 Tcmbd2/3 RNAi分析 | 第92-95页 |
| 4.3.5 赤拟谷盗成虫运动能力分析检测 | 第95页 |
| 4.3.6 赤拟谷盗成虫食量及体重分析检测 | 第95页 |
| 4.3.7 赤拟谷盗产卵量及孵化率统计 | 第95页 |
| 4.3.8 赤拟谷盗TcMBD2/3及人类HsMBD2体外重组蛋白表达及纯化 | 第95-99页 |
| 4.3.9 电泳凝胶迁移率实验 | 第99-101页 |
| 4.4 结果与分析 | 第101-108页 |
| 4.4.1 赤拟谷盗Tcmbd2/3基因的鉴定及序列分析 | 第101-103页 |
| 4.4.2 赤拟谷盗Tcmbd2/3时空表达模式 | 第103页 |
| 4.4.3 幼虫时期敲减赤拟谷盗Tcmbd2/3基因导致赤拟谷盗变态发育缺陷 | 第103-105页 |
| 4.4.4 Tcmbd2/3基因缺失的成虫呈现严重的神经缺陷 | 第105-106页 |
| 4.4.5 Tcmbd2/3缺失的雌虫丧失产卵能力 | 第106-107页 |
| 4.4.6 TcMBD2/3蛋白对不同类型甲基化胞嘧啶位点结合能力检测 | 第107-108页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第108-111页 |
| 第五章 总结与展望 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-125页 |
| 在读期间已/待发表的学术论文及研究成果 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126页 |
