摘要 | 第2-4页 |
Abstract | 第4-5页 |
英文缩写表 | 第7-11页 |
综述一:猪繁殖与呼吸综合征病毒研究进展 | 第11-16页 |
1. 分类地位和理化特性 | 第11-12页 |
2. 基因组结构和编码蛋白 | 第12-14页 |
2.1. 病毒非结构蛋白 | 第13页 |
2.2. 病毒主要囊膜蛋白 | 第13页 |
2.3. 病毒次要囊膜蛋白 | 第13-14页 |
2.4. 病毒核衣壳蛋白 | 第14页 |
3. 病毒受体 | 第14-15页 |
4. 免疫应答 | 第15-16页 |
综述二:微小RNA及其传递载体 | 第16-20页 |
1. miRNA的结构与功能 | 第16-17页 |
1.1. 结构与表达 | 第16-17页 |
1.2. 功能 | 第17页 |
2. miRNA的人工合成与表达 | 第17-18页 |
3. miRNA表达载体 | 第18-19页 |
3.1. 病毒载体 | 第18-19页 |
3.2. 非病毒性载体 | 第19页 |
4. 总结 | 第19-20页 |
研究内容一:重组腺病毒和外排体传送的CD169、CD163人工微小RNA对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的抑制作用 | 第20-37页 |
1. 材料 | 第20-22页 |
1.1. 细胞、质粒、菌株和毒株 | 第20-21页 |
1.2. 工具酶和主要试剂 | 第21页 |
1.3. 培养基与溶液 | 第21-22页 |
1.4. 主要实验设备 | 第22页 |
2. 方法 | 第22-28页 |
2.1. 重组腺病毒制备和鉴定 | 第22-25页 |
2.1.1. 感受态细胞制备 | 第22页 |
2.1.2. 穿梭载体准备 | 第22-23页 |
2.1.3. 重组质粒的制备 | 第23-24页 |
2.1.4. 重组腺病毒的制备 | 第24-25页 |
2.2. amiRNA表达检测 | 第25-26页 |
2.2.1. 细胞的rAd转导 | 第25页 |
2.2.2. amiRNA表达检测 | 第25-26页 |
2.2.3. amiRNA的抑制作用检测 | 第26页 |
2.3. 外排体制备和检测 | 第26-27页 |
2.3.1. 外排体制备 | 第26-27页 |
2.3.2. 外排体中amiRNA检测 | 第27页 |
2.3.3. 外排体内amiRNA的活性检测 | 第27页 |
2.4. amiRNA抗病毒作用检测 | 第27-28页 |
3. 结果 | 第28-34页 |
3.1. 重组腺病毒制备与鉴定 | 第28-30页 |
3.2. amiRNA表达与分泌检测 | 第30-31页 |
3.3. amiRNA抑制靶基因表达检测 | 第31-32页 |
3.4. Sn和CD163 amiRNA的抗病毒作用检测 | 第32-34页 |
4. 讨论 | 第34-37页 |
研究内容二:外排体传递的3'UTR微小RNA对PRRSV复制的抑制作用 | 第37-50页 |
1. 材料 | 第37-38页 |
1.1. 细胞,质粒,菌株和毒株 | 第37-38页 |
1.2. 工具酶和主要试剂 | 第38页 |
1.3. 培养基与溶液 | 第38页 |
1.4. 主要实验设备 | 第38页 |
2. 方法 | 第38-41页 |
2.1. 细胞的培养 | 第38-39页 |
2.2. 重组腺病毒制备、感染和amiRNA检测 | 第39页 |
2.3. 外排体分离纯化、western blot和形态学鉴定 | 第39-40页 |
2.4. 外排体标记、细胞传递和观察 | 第40页 |
2.5. amiRNA定量检测 | 第40-41页 |
2.6. 外排体介导的amiRNA抗病毒作用检测 | 第41页 |
2.7. 数据处理 | 第41页 |
3. 结果 | 第41-48页 |
3.1. 重组腺病毒转导细胞的amiRNA表达 | 第41-42页 |
3.2. 外排体的鉴定 | 第42-43页 |
3.3. 外排体介导的amiRNA分泌 | 第43-44页 |
3.4. 外排体介导的amiRNA传递 | 第44-45页 |
3.5. 外排体向PAM的amiRNA传递 | 第45-46页 |
3.6. 外排体传递的amiRNA的抗病毒作用 | 第46-48页 |
4. 讨论 | 第48-50页 |
参考文献 | 第50-61页 |
发表论文 | 第61-62页 |
致谢 | 第62-63页 |