| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-20页 |
| 1.1 乙醇酸的性质及应用 | 第8-9页 |
| 1.2 化学法生产乙醇酸 | 第9-10页 |
| 1.3 生物法合成乙醇酸 | 第10-16页 |
| 1.4 影响大肠杆菌中乙醇酸发酵的条件 | 第16-17页 |
| 1.4.1 葡萄糖浓度 | 第16页 |
| 1.4.2 氮源种类及浓度 | 第16页 |
| 1.4.3 诱导条件 | 第16-17页 |
| 1.4.4 补料策略 | 第17页 |
| 1.5 本课题的立题意义与研究内容 | 第17-20页 |
| 1.5.1 立题意义 | 第17-18页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第18-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-28页 |
| 2.1 材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 工具酶 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂及药品 | 第20页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.4 菌株与质粒 | 第21页 |
| 2.1.5 培养基 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-28页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第22页 |
| 2.2.2 大肠杆菌基因组的提取 | 第22页 |
| 2.2.3 基因片段的PCR扩增 | 第22页 |
| 2.2.4 质粒的提取 | 第22页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态的制备 | 第22-23页 |
| 2.2.6 重组质粒的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.7 基因敲除及验证 | 第24页 |
| 2.2.8 重组菌株的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.9 培养方法 | 第25页 |
| 2.2.10 目的蛋白表达情况测试 | 第25页 |
| 2.2.11 酶活测定方法 | 第25-26页 |
| 2.2.12 代谢物的测定 | 第26页 |
| 2.2.13 DNS法检测葡萄糖的浓度 | 第26-28页 |
| 第三章 结果与分析 | 第28-44页 |
| 3.1 乳酸脱氢酶编码基因ldhA的敲除 | 第28-29页 |
| 3.2 关键基因表达水平的调节 | 第29-36页 |
| 3.2.1 改变表达载体拷贝数调节目的基因表达水平 | 第30-32页 |
| 3.2.2 利用具有不同启动子的表达载体调节关键基因表达水平 | 第32-35页 |
| 3.2.3 过量表达柠檬酸合成酶对糖酸转化率的影响 | 第35-36页 |
| 3.3 改造宿主菌株优化乙醇酸合成途径 | 第36-39页 |
| 3.3.1 敲除竞争途径优化乙醇酸合成途径 | 第36-37页 |
| 3.3.2 减少乙醇酸代谢途径优化其合成途径 | 第37-39页 |
| 3.4 发酵优化 | 第39-44页 |
| 3.4.1 氮源优化 | 第39-40页 |
| 3.4.2 碳氮比的优化 | 第40-41页 |
| 3.4.3 诱导条件优化 | 第41页 |
| 3.4.4 分批发酵 | 第41-42页 |
| 3.4.5 间歇补料法流加发酵 | 第42页 |
| 3.4.6 葡萄糖-stat补料法流加发酵 | 第42-44页 |
| 主要结论与展望 | 第44-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录A：补充材料 | 第51-53页 |
| 附录B：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
