| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-26页 |
| 1.1 碳代谢抑制研究进展 | 第15-19页 |
| 1.1.1 枯草芽孢杆菌的碳代谢抑制 | 第15页 |
| 1.1.2 大肠杆菌的碳代谢抑制 | 第15-16页 |
| 1.1.3 假单胞菌的碳代谢抑制 | 第16-17页 |
| 1.1.4 CbrAB/Crc-Hfq/CrcZY系统调控模型 | 第17-19页 |
| 1.2 细菌RNA降解的作用机制 | 第19-24页 |
| 1.2.1 RNA降解保守的基本特征 | 第19-20页 |
| 1.2.2 RNA降解体(Degradosome)组分 | 第20-24页 |
| 1.3 立题依据和技术路线 | 第24-26页 |
| 1.3.1 立题依据 | 第24-25页 |
| 1.3.2 技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 crcZ和crcY的生物信息学和转录特性分析 | 第26-39页 |
| 2.1 材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 培养基与试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第27页 |
| 2.2 方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 野生型A1501基因组的提取 | 第27页 |
| 2.2.2 质粒提取 | 第27页 |
| 2.2.3 PCR反应 | 第27-28页 |
| 2.2.4 重组载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.5 三亲结合实验 | 第29-30页 |
| 2.2.6 菌体的培养与收集 | 第30页 |
| 2.2.7 β-半乳糖苷酶酶活测定 | 第30-31页 |
| 2.2.8 CrcZ和CrcY的生物信息学分析 | 第31页 |
| 2.3 结果 | 第31-37页 |
| 2.3.1 CrcZ和CrcY生物信息学分析 | 第31-33页 |
| 2.3.2 pGD-Pz和pGD-Py重组载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.3.3 crcZ和crcY的转录特性 | 第34-37页 |
| 2.3.4 固氮生长条件下野生型中CrcZ和CrcY的绝对量 | 第37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 Crc和Hfq蛋白影响CrcZ/Y胞内稳定性 | 第39-46页 |
| 3.1 材料 | 第39页 |
| 3.1.1 菌株 | 第39页 |
| 3.1.2 培养基与试剂 | 第39页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第39页 |
| 3.2 方法 | 第39-41页 |
| 3.2.1 固氮条件下RNA稳定性测定 | 第39-40页 |
| 3.2.2 苯甲酸唯一碳源条件下RNA稳定性测定 | 第40页 |
| 3.2.3 细菌总RNA的提取以及cDNA的合成 | 第40-41页 |
| 3.2.4 QuantitiveReal-timePCR | 第41页 |
| 3.3 结果 | 第41-44页 |
| 3.3.1 野生型和Δcrc中crcZ和crcY的相对定量 | 第41-42页 |
| 3.3.2 野生型和Δcrc中cbrB和rpoN的相对定量 | 第42页 |
| 3.3.3 野生型和Δcrc中CrcZ和CrcY的稳定性测定 | 第42-44页 |
| 3.3.4 野生型和Δhfq中CrcZ/Y的稳定性测定 | 第44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 CrcZ和CrcY降解模式的初步探究 | 第46-60页 |
| 4.1 材料 | 第46页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第46页 |
| 4.1.2 酶和试剂 | 第46页 |
| 4.1.3 仪器 | 第46页 |
| 4.2 方法 | 第46-52页 |
| 4.2.1 野生型A1501基因组的提取 | 第46-47页 |
| 4.2.2 质粒的提取 | 第47页 |
| 4.2.3 PCR反应 | 第47页 |
| 4.2.4 蛋白表达载体pTWcrc和pET-srne的构建 | 第47-48页 |
| 4.2.5 Crc蛋白的表达与纯化 | 第48-49页 |
| 4.2.6 截短RNaseE的表达与纯化 | 第49-50页 |
| 4.2.7 SDS-PAGE | 第50-51页 |
| 4.2.8 CrcZ和CrcY全长的制备 | 第51-52页 |
| 4.3 结果 | 第52-58页 |
| 4.3.1 CrcZ和CrcY全长的制备 | 第52-53页 |
| 4.3.2 pTWcrc重组载体的构建 | 第53-54页 |
| 4.3.3 Crc蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| 4.3.4 A1501中RNase的生物信息学分析 | 第55-56页 |
| 4.3.5 pETsrne重组载体的构建 | 第56-57页 |
| 4.3.6 截短RNaseE蛋白的纯化 | 第57-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 全文结论 | 第60-63页 |
| 5.1 结论与讨论 | 第60-62页 |
| 5.2 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
