| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第15-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-28页 |
| 1.1 纤维素酶的研究进展 | 第16-21页 |
| 1.1.1 纤维素酶的来源 | 第16-17页 |
| 1.1.2 纤维素酶的分类 | 第17-18页 |
| 1.1.3 纤维素酶的性质 | 第18页 |
| 1.1.4 纤维素酶的结构 | 第18-19页 |
| 1.1.5 纤维素酶的基因克隆与表达 | 第19页 |
| 1.1.6 嗜热纤维素酶 | 第19页 |
| 1.1.7 纤维素酶的协同 | 第19-21页 |
| 1.1.8 纤维素酶的应用 | 第21页 |
| 1.2 膨胀素的研究进展 | 第21-28页 |
| 1.2.1 Expansin的发现与来源 | 第21-22页 |
| 1.2.2 Expansin的家族与结构 | 第22-23页 |
| 1.2.3 微生物源类膨胀素 | 第23-24页 |
| 1.2.4 膨胀素作用机制 | 第24-26页 |
| 1.2.5 膨胀素生理功能及应用 | 第26页 |
| 1.2.6 本研究的目的与意义 | 第26-28页 |
| 第二章 来源于TalaromycesleycettanusJCM12802的嗜热纤维素酶基因的表达及功能研究 | 第28-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和引物测序合成 | 第28页 |
| 2.1.2 实验仪器、商品酶及其他试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 培养基及试剂的配置 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-39页 |
| 2.2.1 基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2 提取TalaromycesleycettanusJCM12802的总RNA | 第30页 |
| 2.2.3 Tlcel5A和Tlcel6A基因的克隆 | 第30-32页 |
| 2.2.3.1 获得完整DNA和cDNA序列 | 第31页 |
| 2.2.3.2 核酸胶验证并回收 | 第31-32页 |
| 2.2.3.3 连接pEASY-T3载体 | 第32页 |
| 2.2.3.4 转化过程 | 第32页 |
| 2.2.4 真核表达载体pPIC9-Tlcel5A和pPIC9-Tlcel6A构建 | 第32-34页 |
| 2.2.4.1 Tlcel5A-T3、Tlcel6A-T3和pPIC9质粒提取 | 第32-33页 |
| 2.2.4.2 酶切、连接与转化 | 第33-34页 |
| 2.2.4.3 Tlcel6A-3A突变体的构建 | 第34页 |
| 2.2.5 基因Tlcel5A和Tlcel6A(突变基因Tlcel6A-3A)真核表达及蛋白纯化 | 第34-37页 |
| 2.2.5.1 基因Tlcel5A和Tlcel6A(突变基因Tlcel6A-3A)真核表达 | 第34-35页 |
| 2.2.5.2 毕赤酵母中基因Tlcel5A和Tlcel6A(Tlcel6A-3A)表达菌株的筛选 | 第35页 |
| 2.2.5.3 纤维素酶活力测定 | 第35-36页 |
| 2.2.5.4 TlCel5A和TlCel6A(TlCel6A-3A)酶液的扩大培养 | 第36页 |
| 2.2.5.5 TlCel5A和TlCel6A(TlCel6A-3A)纤维素酶的纯化 | 第36-37页 |
| 2.2.6 纤维素酶酶学性质测定 | 第37-39页 |
| 2.2.6.1 测定纤维素酶活标准曲线 | 第37页 |
| 2.2.6.2 纤维素酶TlCel5A和TlCel6A(TlCel6A-3A)的基本性质 | 第37-38页 |
| 2.2.6.3 纤维素酶TlCel5A和TlCel6A的底物特异性和动力学参数 | 第38页 |
| 2.2.6.4 纤维素酶对纤维寡糖水解产物测定 | 第38页 |
| 2.2.6.5 TlCel5A和TlCel6A对微晶纤维素、PASC、气爆秸秆水解协同作用分析 | 第38-39页 |
| 2.3 实验结果 | 第39-51页 |
| 2.3.1 克隆序列和结构分析 | 第39-42页 |
| 2.3.2 酵母表达载体构建 | 第42-43页 |
| 2.3.3 重组酶TlCel5A和TlCel6A的表达纯化 | 第43页 |
| 2.3.4 纯化酶TlCel5A和TlCel6A的酶学性质研究 | 第43-51页 |
| 2.3.4.1 标准曲线的绘制 | 第43-44页 |
| 2.3.4.2 温度和pH对重组酶TlCel5A和TlCel6A的影响 | 第44-45页 |
| 2.3.4.3 重组酶TlCel5A和TlCel6A底物特异性和动力学参数 | 第45-47页 |
| 2.3.4.4 重组酶TlCel5A和TlCel6A对纤维寡糖水解产物分析 | 第47-49页 |
| 2.3.4.5 重组酶TlCel5A和TlCel6A对微晶纤维素、气爆秸秆和PASC协同作用分析 | 第49-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-52页 |
| 2.5 本章小结 | 第52-54页 |
| 第三章 来源于TalaromycesleycettanusJCM12802的类膨胀素基因的表达及功能探究 | 第54-66页 |
| 3.1 实验材料 | 第54页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和引物测序合成 | 第54页 |
| 3.1.2 实验仪器、商品酶及其他试剂 | 第54页 |
| 3.1.3 培养基及试剂的配置 | 第54页 |
| 3.2 实验方法 | 第54-58页 |
| 3.2.1 提取T.leycettanusJCM12802的总RNA | 第54页 |
| 3.2.2 类膨胀素基因(expansin)的克隆 | 第54-55页 |
| 3.2.3 类膨胀素(expansin)融合基因的扩增 | 第55-56页 |
| 3.2.4 类膨胀素基因(expansin)及其融合基因真核表达载体的构建 | 第56页 |
| 3.2.5 重组质粒pPIC9/Tlexlx1和pPIC9/CBM-Tlexlx1在毕赤酵母中的表达与纯化 | 第56-57页 |
| 3.2.6 酶活测定方法 | 第57页 |
| 3.2.7 蛋白定量 | 第57页 |
| 3.2.8 类膨胀素TlEXLX1和CBM-TlEXLX1基本酶学性质的测定 | 第57-58页 |
| 3.2.8.1 最适pH和最适温度的测定 | 第57页 |
| 3.2.8.2 TlEXLX1和CBM-TlEXLX1比活力及底物特异性的测定 | 第57-58页 |
| 3.2.8.3 TlEXLX1和CBM-TlEXLX1与纤维素酶的协同实验 | 第58页 |
| 3.2.8.4 TlEXLX1和CBM-TlEXLX1光学显微镜和扫描电镜实验 | 第58页 |
| 3.3 实验结果 | 第58-63页 |
| 3.3.1 类膨胀素TlEXLX1基因克隆及序列分析 | 第58-59页 |
| 3.3.2 表达载体pPIC9/Tlexlx1和pPIC9/CBM-Tlexlx1的构建及在毕赤酵母中的表达与纯化分析 | 第59-60页 |
| 3.3.3 TlEXLX1和CBM-TlEXLX1基本酶学性质的分析 | 第60-63页 |
| 3.3.3.1 TlEXLX1和CBM-TlEXLX1最适pH和最适温度的测定 | 第60页 |
| 3.3.3.2 TlEXLX1和CBM-TlEXLX1协同实验的测定 | 第60-62页 |
| 3.3.3.3 TlEXLX1和CBM-TlEXLX1底物特异性及比活力的测定 | 第62页 |
| 3.3.3.4 TlEXLX1和CBM-TlEXLX1光学显微镜和扫描电镜实验分析 | 第62-63页 |
| 3.4 讨论 | 第63-65页 |
| 3.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 第四章 全文结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简历 | 第76页 |
