| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-22页 |
| 1.1 禽流感病毒概述 | 第14页 |
| 1.2 禽流感病毒结构和理化性质 | 第14-15页 |
| 1.3 禽流感病毒基因组结构与功能 | 第15页 |
| 1.4 禽流感病毒编码蛋白的结构与功能 | 第15-17页 |
| 1.4.1 血凝素HA | 第15-16页 |
| 1.4.2 神经氨酸酶NA | 第16页 |
| 1.4.3 聚合酶(Polymerase) | 第16页 |
| 1.4.4 基质蛋白M | 第16-17页 |
| 1.4.5 核蛋白NP | 第17页 |
| 1.4.6 非结构蛋白NS | 第17页 |
| 1.5 禽流感病毒的复制 | 第17页 |
| 1.6 禽流感病毒包装信号的简介 | 第17-19页 |
| 1.7 利用流感病毒表达外源蛋白 | 第19-20页 |
| 1.8 A型流感的反向遗传操作系统 | 第20-21页 |
| 1.9 鸭坦布苏病毒致病特征及E蛋白的生物学功能 | 第21页 |
| 1.10 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 表达外源基因的流感病毒构建 | 第22-42页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 载体、细胞和质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 主要缓冲液及培养基 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 抗体 | 第23页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 流感病毒PR8的HA基因包装信号表达质粒构建 | 第24-26页 |
| 2.2.2 HA基因包装信号表达外源基因的质粒构建 | 第26-29页 |
| 2.2.3 转染 | 第29页 |
| 2.2.4 救获病毒的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.5 Western Blot | 第30-31页 |
| 2.2.6 激光共聚焦检测外源基因表达 | 第31-32页 |
| 2.2.7 GC含量及RNA二级结构预测分析 | 第32页 |
| 2.3 结果 | 第32-41页 |
| 2.3.1 PUC-HA-E/opti-E/EdIII/opti-EDIII-HA质粒鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.2 PUC-HA-Renilla-HA质粒鉴定 | 第33页 |
| 2.3.3 PUC-HA-441-HA-HA、PUC-HA-441-opti-HA-HA质粒鉴定 | 第33页 |
| 2.3.4 HA-Renilla-HA病毒鉴定 | 第33页 |
| 2.3.5 HA-E/opti-E/EDIII/opti-EDIII-HA病毒鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.6 HA-441-HA/opti-HA-HA病毒鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.7 Western Blot | 第35页 |
| 2.3.8 激光共聚焦对外源蛋白的定位 | 第35-36页 |
| 2.3.9 GC含量及RNA二级结构预测分析 | 第36-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 HA-EDIII-HA病毒生长特性及在体内表达外源蛋白 | 第42-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第42-44页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第42页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 3.1.3 主要缓冲液 | 第42-43页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第43页 |
| 3.1.5 引物序列 | 第43-44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-47页 |
| 3.2.1 病毒的传代培养 | 第44页 |
| 3.2.2 病毒滴度的测定 | 第44页 |
| 3.2.3 病毒在MDCK-HA2细胞上生长曲线的绘制 | 第44-45页 |
| 3.2.4 HA-EDⅢ-HA在动物体表达外源蛋白 | 第45-47页 |
| 3.3 结果 | 第47-50页 |
| 3.3.1 病毒在MDCK-HA2细胞上的传代培养 | 第47页 |
| 3.3.2 病毒在MDCK-HA2细胞上生长曲线的绘制 | 第47-48页 |
| 3.3.3 EDⅢ抗体检测 | 第48-49页 |
| 3.3.4 攻毒后血清中病毒核酸拷贝数的检测 | 第49-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-51页 |
| 第四章 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
