| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-26页 |
| 1.1 巴斯德毕赤酵母表达系统研究概况 | 第11-16页 |
| 1.1.1 毕赤酵母表达系统的优点 | 第11-13页 |
| 1.1.2 毕赤酵母表达系统的影响因素 | 第13-15页 |
| 1.1.3 毕赤酵母表达系统的问题 | 第15-16页 |
| 1.2 透明颤菌血红蛋白的研究 | 第16-20页 |
| 1.2.1 透明颤菌血红蛋白的结构与性质 | 第16-17页 |
| 1.2.2 透明颤菌血红蛋白生理功能研究 | 第17-19页 |
| 1.2.3 透明颤菌血红蛋白的应用 | 第19-20页 |
| 1.3 基于 RNA-SEQ 技术的转录组研究 | 第20-24页 |
| 1.3.1 RNA-Seq 技术平台 | 第20-21页 |
| 1.3.2 RNA-Seq 的技术优势 | 第21-22页 |
| 1.3.3 RNA-Seq 技术的应用 | 第22-23页 |
| 1.3.4 毕赤酵母转录组学研究进展 | 第23-24页 |
| 1.4 本课题的研究意义及主要内容 | 第24-26页 |
| 1.4.1 本课题的研究意义 | 第24页 |
| 1.4.2 本课题研究的内容 | 第24-26页 |
| 第二章 共表达透明颤菌血红蛋白对脂肪酶表达的影响 | 第26-55页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 材料与设备 | 第26-32页 |
| 2.2.1 菌种和质粒 | 第26-27页 |
| 2.2.2 引物 | 第27-28页 |
| 2.2.3 主要仪器和设备 | 第28-29页 |
| 2.2.4 主要试剂 | 第29-30页 |
| 2.2.5 溶液和培养基 | 第30-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-43页 |
| 2.3.1 菌体的培养和保存 | 第32页 |
| 2.3.2 毕赤酵母的基因组提取 | 第32-33页 |
| 2.3.3 载体质粒的构建 | 第33-37页 |
| 2.3.4 重组毕赤酵母的构建与筛选 | 第37-39页 |
| 2.3.5 重组毕赤酵母的摇瓶发酵 | 第39-40页 |
| 2.3.6 vgb 基因拷贝数的检测 | 第40页 |
| 2.3.7 VHb 的活性检测 | 第40-41页 |
| 2.3.8 脂肪酶 CALB 酶活力检测 | 第41-42页 |
| 2.3.9 蛋白质的 western-blot 分析 | 第42-43页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第43-52页 |
| 2.4.1 目的基因的获取 | 第43-44页 |
| 2.4.2 重组毕赤酵母菌株的构建 | 第44-45页 |
| 2.4.3 信号肽的定位效果 | 第45-46页 |
| 2.4.4 表达 CALB 毕赤酵母重组菌株的筛选 | 第46-47页 |
| 2.4.5 VHb 在重组毕赤酵母中的表达 | 第47-49页 |
| 2.4.6 VHb 的表达对重组毕赤酵母的生长和 CALB 表达的影响 | 第49-52页 |
| 2.5 本章小结 | 第52-55页 |
| 第三章 基于 RNA-SEQ 技术对 VHB 影响脂肪酶表达的机理分析 | 第55-66页 |
| 3.1 引言 | 第55页 |
| 3.2 材料与设备 | 第55-56页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第55-56页 |
| 3.2.2 主要仪器和设备 | 第56页 |
| 3.2.3 化学试剂 | 第56页 |
| 3.2.4 溶液的配制 | 第56页 |
| 3.3 实验方法 | 第56-58页 |
| 3.3.1 重组毕赤酵母的摇瓶发酵 | 第56页 |
| 3.3.2 重组毕赤酵母总 RNA 的提取 | 第56-57页 |
| 3.3.3 总 RNA 的纯化 | 第57页 |
| 3.3.4 RNA 样品的质量检测 | 第57页 |
| 3.3.5 文库的构建、测序及测序数据匹配 | 第57-58页 |
| 3.3.6 基因表达水平的标准化 | 第58页 |
| 3.3.7 软件分析 | 第58页 |
| 3.3.8 ATP 含量的测定 | 第58页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第58-65页 |
| 3.4.1 测序用 RNA 样品的制备 | 第58-60页 |
| 3.4.2 样品的重复性分析 | 第60页 |
| 3.4.3 转录水平的差异表达基因分析 | 第60-61页 |
| 3.4.4 差异表达基因参与的途径注释 | 第61页 |
| 3.4.5 VHb 对重组毕赤酵母能量代谢的影响 | 第61-64页 |
| 3.4.6 ATP 水平的验证 | 第64-65页 |
| 3.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 结论与展望 | 第66-68页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 展望 | 第67页 |
| 本论文的创新点 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 附录 | 第72-80页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附件 | 第82页 |
