| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 流行乙型脑炎的流行病学特性 | 第12-14页 |
| 1.2 乙型脑炎病毒的病原学特征 | 第14页 |
| 1.3 JEV的分子生物学特征 | 第14-17页 |
| 1.3.1 基因组结构与功能 | 第14-15页 |
| 1.3.2 JEV基因组编码蛋白概况 | 第15-17页 |
| 1.4 乙型脑炎疫苗的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.4.1 目前投入临床研究或使用的乙型脑炎疫苗 | 第17页 |
| 1.4.2 实验室研发阶段乙型脑炎疫苗 | 第17-19页 |
| 1.5 伪狂犬病以及伪狂犬病毒活载体的研究进展 | 第19-21页 |
| 2 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-35页 |
| 3.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 3.1.1 毒株与细胞 | 第22页 |
| 3.1.2 菌株载体与质粒 | 第22-23页 |
| 3.1.3 主要工具酶及试剂 | 第23-24页 |
| 3.1.4 培养基及其配制方法 | 第24页 |
| 3.1.5 主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第24-26页 |
| 3.1.6 本研究所用PCR引物 | 第26页 |
| 3.1.7 试验动物及试验地点 | 第26页 |
| 3.2 实验方法 | 第26-35页 |
| 3.2.1 JEV(SX09S-01)毒株的扩增 | 第26页 |
| 3.2.2 JEV(SX09S-01)毒株总RNA提取 | 第26-27页 |
| 3.2.3 JEV PrM-E基因的RT-PCR扩增 | 第27页 |
| 3.2.4 扩增并回收JEV PrM-E基因 | 第27-28页 |
| 3.2.5 连接JEV PrM-E片段于pMD18-T载体 | 第28页 |
| 3.2.6 连接产物的转化、挑菌及培养 | 第28页 |
| 3.2.7 质粒的小量制备(OMEGA小提试剂盒) | 第28-29页 |
| 3.2.8 质粒的大量制备(OMEGA大提试剂盒) | 第29-30页 |
| 3.2.9 PRV病毒基因组的提取 | 第30页 |
| 3.2.10 脂质体共转染法及空斑纯化 | 第30-31页 |
| 3.2.11 SDS-PAGE分析和Western blot检测 | 第31页 |
| 3.2.12 遗传稳定性与一步生长曲线 | 第31-32页 |
| 3.2.13 动物实验 | 第32-33页 |
| 3.2.14 实时荧光定量PCR检测干扰素相对表达水平 | 第33-35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-52页 |
| 4.1 JEV PrM-E基因的克隆和序列的分析 | 第35-37页 |
| 4.1.1 JEV PrM-E基因的RT-PCR扩增 | 第35页 |
| 4.1.2 JEV PrM-E基因测序分析 | 第35-37页 |
| 4.2 转移质粒pIE-pCA-PrM-E的构建 | 第37-39页 |
| 4.3 重组PRV病毒的构建 | 第39-43页 |
| 4.3.1 重组PRV病毒构建策略及初步鉴定 | 第39-41页 |
| 4.3.2 重组病毒PRV TK-/gE-/PrM-E+的空斑纯化及PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 4.3.3 重组病毒PRV TK~-/gG~-/PrM-E~+/gE~-/PrM-E~+的空斑纯化及PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 4.4 重组病毒外源蛋白的western blot检测 | 第43-44页 |
| 4.5 重组病毒PRV TK~-/gE~-/PrM-E~+遗传稳定性鉴定 | 第44-45页 |
| 4.6 重组病毒PRV TK~-/gE~-/PrM-E~+一步生长曲线 | 第45-46页 |
| 4.7 小鼠动物试验研究 | 第46-52页 |
| 4.7.1 重组病毒诱导产生的ELISA抗体水平 | 第46-47页 |
| 4.7.2 重组病毒诱导产生的中和抗体水平 | 第47-49页 |
| 4.7.3 动物保护力实验 | 第49-52页 |
| 5 讨论与结论 | 第52-56页 |
| 5.1 讨论 | 第52-55页 |
| 5.1.1 重组病毒研究 | 第52-54页 |
| 5.1.2 JEV疫苗研究的展望与设想 | 第54-55页 |
| 5.2 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
