| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-34页 |
| 1.1 丹参概述 | 第18页 |
| 1.2 丹参酚酸类及丹参酮类成分生物合成途径及调控研究进展 | 第18-23页 |
| 1.2.1 丹参酚酸类成分生物合成途径和调控研究进展 | 第18-21页 |
| 1.2.2 丹参酮类成分生物合成途径和调控研究进展 | 第21-23页 |
| 1.3 WRKY转录因子参与植物次生代谢的研究进展 | 第23-30页 |
| 1.3.1 WRKY在萜类生物合成中的调控作用 | 第23-24页 |
| 1.3.2 WRKY在生物碱合成中的调控作用 | 第24-29页 |
| 1.3.3 WRKY在酚类生物合成中的调控作用 | 第29-30页 |
| 1.4 茉莉酸(JAs)信号在次生代谢调控中的作用 | 第30-32页 |
| 1.4.1 JAs通过介导转录因子调控次生代谢的过程 | 第30-31页 |
| 1.4.2 JAs介导转录因子调控丹参次生代谢物生物合成的研究进展 | 第31-32页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第32-34页 |
| 第二章 丹参转录组中WRKY转录因子的鉴定与生物信息学分析 | 第34-46页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 仪器、试剂与材料 | 第34-36页 |
| 2.2.1 仪器 | 第34-35页 |
| 2.2.2 试剂 | 第35页 |
| 2.2.3 实验材料 | 第35-36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-37页 |
| 2.3.1 毛状根培养 | 第36页 |
| 2.3.2 MeJA诱导子制备 | 第36页 |
| 2.3.3 毛状根处理 | 第36页 |
| 2.3.4 WRKY的筛选 | 第36页 |
| 2.3.5 SmWRKY的生物信息学分析 | 第36-37页 |
| 2.4 实验结果 | 第37-44页 |
| 2.4.1 SmWRKY筛选结果分析 | 第37-42页 |
| 2.4.2 SmWRKY保守基序的预测 | 第42-43页 |
| 2.4.3 SmWRKY系统发育树构建 | 第43-44页 |
| 2.5 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 SmWRKY基因组织特异性表达分析 | 第46-53页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 仪器、试剂与材料 | 第46-47页 |
| 3.2.1 仪器 | 第46页 |
| 3.2.2 试剂 | 第46页 |
| 3.2.3 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-48页 |
| 3.3.1 丹参植株总RNA提取 | 第47页 |
| 3.3.2 反转录反应 | 第47-48页 |
| 3.3.3 丹参植株中WRKY基因及酚酸类和丹参酮生物合成相关基因表达检测 | 第48页 |
| 3.3.4 基因表达谱(Heatmap图)构建 | 第48页 |
| 3.4 实验结果 | 第48-51页 |
| 3.4.1 SmWRKY在不同花期组织特异性表达分析 | 第48-49页 |
| 3.4.2 丹参酮丹酚酸生物合成相关基因表达分析 | 第49-51页 |
| 3.5 讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 MeJA诱导条件下SmWRKY基因表达及其与丹参有效成分积累之间的关系 | 第53-62页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 仪器、试剂与材料 | 第53-54页 |
| 4.2.1 仪器 | 第53页 |
| 4.2.2 试剂 | 第53页 |
| 4.2.3 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.3 实验方法 | 第54-55页 |
| 4.3.1 毛状根培养 | 第54页 |
| 4.3.2 诱导子制备 | 第54页 |
| 4.3.3 毛状根处理 | 第54页 |
| 4.3.4 丹参毛状根总RNA提取 | 第54页 |
| 4.3.5 反转录反应 | 第54页 |
| 4.3.6 丹参毛状根中SmWRKY基因及酚酸类和丹参酮合成相关基因表达检测 | 第54页 |
| 4.3.7 丹参毛状根中有效成分提取及测定 | 第54-55页 |
| 4.3.8 构建―基因-代谢物‖关联谱来推测参与次生代谢调控的WRKY转录因子 | 第55页 |
| 4.4 实验结果 | 第55-60页 |
| 4.4.1 MeJA对SmWRKY以及次生代谢相关酶基因表达的变化 | 第55-57页 |
| 4.4.2 MeJA条件下丹参毛状根中丹参酮类和酚酸类成分积累的模式 | 第57-59页 |
| 4.4.3 推测参与丹参次生代谢调控的SmWRKY | 第59-60页 |
| 4.5 讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 SmWRKY65基因在拟南芥中的遗传转化 | 第62-72页 |
| 5.1 引言 | 第62页 |
| 5.2 仪器、试剂与材料 | 第62-63页 |
| 5.2.1 仪器 | 第62页 |
| 5.2.2 试剂 | 第62页 |
| 5.2.3 实验材料 | 第62-63页 |
| 5.3 实验方法 | 第63-70页 |
| 5.3.1 丹参总RNA提取 | 第63页 |
| 5.3.2 丹参cDNA合成 | 第63页 |
| 5.3.3 丹参SmWRKY65基因的获得 | 第63-65页 |
| 5.3.4 重组过表达载体pCAMBIA-1300:SmWRKY65 | 第65-68页 |
| 5.3.5 农杆菌GV3101感受态细胞的制备及转化 | 第68-69页 |
| 5.3.6 农杆菌介导的转基因拟南芥的获得 | 第69页 |
| 5.3.7 转基因拟南芥鉴定 | 第69-70页 |
| 5.4 实验结果 | 第70-71页 |
| 5.4.1 SmWRKY65基因的克隆 | 第70页 |
| 5.4.2 SmWRKY65基因过表达拟南芥PCR鉴定 | 第70-71页 |
| 5.5 讨论 | 第71-72页 |
| 第六章 总结 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 附录 | 第84-102页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
