| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-19页 |
| 1.1 S-腺苷蛋氨酸脱羧酶 | 第12-13页 |
| 1.2 植物SAMDC基因研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.1 植物中已经分离得到的SAMDC基因 | 第13-14页 |
| 1.2.2 植物SAMDC基因生物学信息学研究 | 第14-15页 |
| 1.2.3 植物SAMDC基因表达分析研究 | 第15-16页 |
| 1.2.4 植物SAMDC基因遗传转化研究 | 第16页 |
| 1.3 植物中多胺的生物学功能 | 第16-18页 |
| 1.3.1 多胺与植物的生长发育 | 第17页 |
| 1.3.2 多胺与逆境胁迫 | 第17-18页 |
| 1.4 本课题研究意义及主要内容 | 第18-19页 |
| 1.4.1 研究意义 | 第18页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-34页 |
| 2.1 试验材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 原料 | 第19页 |
| 2.1.2 试验药品和配置方法 | 第19-20页 |
| 2.1.3 试验仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.4 培养基 | 第21-22页 |
| 2.2 方法与步骤 | 第22-34页 |
| 2.2.1 ScSAMDC基因的克隆与序列分析 | 第22-26页 |
| 2.2.1.1 甘蔗叶片总RNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.1.2 甘蔗cDNA第一链的合成 | 第22-23页 |
| 2.2.1.3 目的基因的引物设计和PCR的扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.1.3 目的片段的回收 | 第24页 |
| 2.2.1.4 JM109化学感受态细胞的制作 | 第24-25页 |
| 2.2.1.5 目的片段的连接、转化、阳性克隆的鉴定及序列测定 | 第25页 |
| 2.2.1.6 生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 2.2.2 ScSAMDC基因在PEG胁迫下的表达特性分析 | 第26-27页 |
| 2.2.2.1 甘蔗PEG胁迫处理 | 第26页 |
| 2.2.2.2 甘蔗叶片RNA提取与cDNA第一链合成 | 第26-27页 |
| 2.2.2.3 RTFQ-PCR反应 | 第27页 |
| 2.2.3 ScSAMDC3基因的植物表达载体构建 | 第27-29页 |
| 2.2.3.1 目的基因引物设计 | 第27页 |
| 2.2.3.2 目的基因片段的扩增与回收 | 第27-28页 |
| 2.2.3.3 pBI121质粒的提取 | 第28页 |
| 2.2.3.4 双酶切及目的片段的回收 | 第28页 |
| 2.2.3.5 JM109电脉冲感受态细胞的制作 | 第28页 |
| 2.2.3.6 目的片段与载体的连接、转化和阳性克隆的筛选 | 第28-29页 |
| 2.2.3.7 重组质粒的提取及酶切验证 | 第29页 |
| 2.2.4 ScSAMDC3基因转化烟草的研究 | 第29-34页 |
| 2.2.4.1 农杆菌EHA105感受态细胞的制作 | 第29-30页 |
| 2.2.4.2 重组质粒转化EHA105感受态细胞及阳性克隆的筛选 | 第30页 |
| 2.2.4.3 烟草无菌苗和愈伤组织的获得 | 第30-31页 |
| 2.2.4.4 根癌农杆菌介导转化烟草 | 第31-32页 |
| 2.2.4.5 转基因烟草DNA的提取和PCR检测 | 第32-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-56页 |
| 3.1 目的基因的克隆 | 第34-39页 |
| 3.1.1 甘蔗叶片总RNA的提取 | 第34页 |
| 3.1.2 甘蔗cDNA第一链的合成 | 第34-35页 |
| 3.1.3 目的基因的引物设计和PCR的扩增 | 第35-37页 |
| 3.1.4 目的片段与克隆载体的连接、转化和阳性克隆鉴定 | 第37-39页 |
| 3.2 生物信息学分析 | 第39-46页 |
| 3.2.1 核酸序列及编码蛋白氨基酸序列的分析 | 第39-43页 |
| 3.2.2 不同植物SAMDC氨基酸序列的多重比对 | 第43-44页 |
| 3.2.3 SAMDC基因进化树分析 | 第44-46页 |
| 3.3 ScSAMDC基因PEG胁迫下的表达特性分析 | 第46-47页 |
| 3.3.1 目的基因和对照基因的扩增结果 | 第46页 |
| 3.3.2 ScSAMDC2和ScSAMDC3基因在PEG胁迫下的表达 | 第46-47页 |
| 3.4 植物表达载体的构建 | 第47-51页 |
| 3.4.1 CaMV35S组成型启动子的表达载体构建策略 | 第47-49页 |
| 3.4.2 目的基因与pBI121质粒的连接、转化和阳性克隆鉴定 | 第49-51页 |
| 3.5 根癌农杆菌介导的遗传转化和转基因烟草植株再生 | 第51-53页 |
| 3.6 转基因烟草植株的检测 | 第53-56页 |
| 第四章 总结与展望 | 第56-58页 |
| 4.1 总结 | 第56-57页 |
| 4.1.1 ScSAMDC基因的克隆以及序列特征分析 | 第56页 |
| 4.1.2 在PEG胁迫下ScSAMDC基因的表达分析 | 第56-57页 |
| 4.1.3 ScSAMDC3基因的植物表达载体构建 | 第57页 |
| 4.1.4 ScSAMDC3基因转化烟草 | 第57页 |
| 4.2 展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第72页 |
