| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1.前言 | 第10-15页 |
| 1.1 木薯淀粉及其基本性状 | 第10页 |
| 1.2 可溶性淀粉酶 | 第10-11页 |
| 1.3 启动子 | 第11-12页 |
| 1.4 启动子序列克隆 | 第12页 |
| 1.5 启动子活性验证 | 第12-13页 |
| 1.5.1 启动子元件预测 | 第12-13页 |
| 1.5.2 启动子活性验证方法 | 第13页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第13-15页 |
| 2.材料与方法 | 第15-31页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第15页 |
| 2.1.2 质粒与菌株 | 第15页 |
| 2.1.3 试剂 | 第15-16页 |
| 2.2 技术路线 | 第16页 |
| 2.3 MeSSS Ⅱb上游启动子序列克隆获得 | 第16-20页 |
| 2.3.1 木薯栽培品种KU50总DNA提取 | 第17页 |
| 2.3.2 MeSSS Ⅱb上游序列扩增 | 第17-18页 |
| 2.3.3 MeSSS Ⅱb上游序列扩增产物胶回收纯化 | 第18页 |
| 2.3.4 MeSSS Ⅱb上游序列转化与克隆 | 第18-19页 |
| 2.3.5 阳性菌株的筛选与保存 | 第19-20页 |
| 2.3.6 pZeroBack -MeSSS Ⅱb质粒提取 | 第20页 |
| 2.4 MeSSS Ⅱb启动子结构分析及元件预测 | 第20-21页 |
| 2.5 MeSSS Ⅱb梯度缺失启动子及完整启动子融合GUS蛋白植物表达载体构建 | 第21-24页 |
| 2.5.1 梯度缺失启动子及完整启动子融合GUS蛋白植物表达载体设计 | 第21页 |
| 2.5.2 MeSSS Ⅱb梯度缺失启动子及完整启动子序列PCR重扩增 | 第21页 |
| 2.5.3 PCR产物回收纯化 | 第21-22页 |
| 2.5.4 连接pZeroBack载体及转化克隆 | 第22页 |
| 2.5.5 阳性菌株的筛选与保存 | 第22页 |
| 2.5.6 pZeroBack -MeSSS Ⅱb梯度缺失启动子及完整启动子序列系列质粒提取与双酶切鉴定 | 第22-23页 |
| 2.5.7 pZeroBack -MeSSS Ⅱb质粒提取 | 第23-24页 |
| 2.6 pCAMBIA1301 -MeSSS Ⅱb Promoters转化农杆菌感受态细胞 | 第24页 |
| 2.7 MeSSS Ⅱb启动子融合GUS蛋白报告基因转化本氏烟草 | 第24-26页 |
| 2.7.1 本氏烟草无菌苗的获得 | 第25页 |
| 2.7.2 农杆菌菌液准备 | 第25页 |
| 2.7.3 农杆菌侵染及转基因本氏烟草植株培养 | 第25-26页 |
| 2.7.4 转基因本氏烟草DNA提取、PCR鉴定 | 第26页 |
| 2.7.5 T_1代本氏烟草的抗性苗筛选 | 第26页 |
| 2.8 转基因本氏烟草GUS蛋白组织染色及酶活性定量分析 | 第26-28页 |
| 2.8.1 GUS蛋白组织染色分析 | 第27页 |
| 2.8.2 转基因植株总蛋白提取 | 第27页 |
| 2.8.3 植株总蛋白浓度测定 | 第27页 |
| 2.8.4 GUS蛋白酶活性定量测定 | 第27-28页 |
| 2.9 MeSSS Ⅱb启动子对乙烯及干旱处理响应分析 | 第28-31页 |
| 2.9.1 木薯KU50组培苗处理实验 | 第28-29页 |
| 2.9.2 木薯KU50组培苗根部组织总RNA提取 | 第29页 |
| 2.9.3 木薯KU50组培苗根部组织总RNA反转录 | 第29-30页 |
| 2.9.4 MeSSS Ⅱb荧光定量PCR | 第30页 |
| 2.9.5 转基因本氏烟草处理 | 第30页 |
| 2.9.6 GUS蛋白酶活性定量分析 | 第30-31页 |
| 3.结果与分析 | 第31-44页 |
| 3.1 MeSSSⅡb上游启动子序列获得及分析 | 第31-34页 |
| 3.1.1 MeSSS Ⅱb上游启动子序列扩增 | 第31页 |
| 3.1.2 MeSSS Ⅱb上游启动子序列分析 | 第31-34页 |
| 3.2 MeSSS Ⅱb完整启动子及梯度缺失启动子融合GUS蛋白植物表达载体构建 | 第34-36页 |
| 3.3 本氏烟草转化及启动子活性检测 | 第36-39页 |
| 3.3.1 植物表达载体转化农杆菌菌株 | 第36页 |
| 3.3.2 本氏烟草转基因株系的获得 | 第36-37页 |
| 3.3.3 GUS蛋白表达组织染色分析及酶活性定量分析 | 第37-39页 |
| 3.4 MeSSS Ⅱb启动子对乙烯及干旱处理响应分析 | 第39-44页 |
| 3.4.1 木薯KU50组培苗MeSSS Ⅱb表达模式分析 | 第39-41页 |
| 3.4.2 转基因本氏烟草乙烯及干旱处理GUS酶活性定量分析 | 第41-44页 |
| 4.讨论 | 第44-47页 |
| 4.1 MeSSS Ⅱb核心启动子区 | 第44-45页 |
| 4.2 MeSSS Ⅱb启动子对环境因子的应答 | 第45-47页 |
| 5.结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 附录 | 第54-58页 |
| 附录1 相关试剂配制 | 第54-55页 |
| 附录2 载体图 | 第55-56页 |
| 附录3 转基因本氏烟草培育 | 第56-57页 |
| 附录4 本研究所使用的引物 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
