| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 符号与缩略语说明 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1 二苯醚类除草剂的简介 | 第13-15页 |
| 1.1 二苯醚类除草剂的基本概述 | 第13页 |
| 1.2 二苯醚类除草剂的应用 | 第13-14页 |
| 1.3 二苯醚类除草剂的基本特征 | 第14页 |
| 1.4 二苯醚类除草剂的作用机制以及选择性 | 第14-15页 |
| 2 二苯醚类除草剂的毒性以及环境危害 | 第15页 |
| 3 二苯醚类除草剂在环境中的检测以及生物修复 | 第15-16页 |
| 4 二苯醚类除草剂微生物降解研究进展 | 第16-20页 |
| 5 酯酶的研究 | 第20-22页 |
| 6 乙羧氟草醚降解目前存在的问题、研究思路及内容 | 第22-23页 |
| 参考文献 | 第23-27页 |
| 第二章 乙羧氟草醚降解菌株KS-1的分离与鉴定 | 第27-41页 |
| 1 材料和方法 | 第27-32页 |
| 1.1 培养基与试剂 | 第27页 |
| 1.2 降解菌株的分离和筛选 | 第27-28页 |
| 1.3 菌体培养与生长量的测定 | 第28页 |
| 1.4 菌株对乙羧氟草醚降解情况的测定 | 第28页 |
| 1.5 降解菌株的16S rRNA基因序列分析 | 第28-31页 |
| 1.6 降解菌株系统发育地位的确定 | 第31页 |
| 1.7 环境条件对降解菌株生长的影响 | 第31-32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-38页 |
| 2.1 污染土壤中乙羧氟草醚降解菌株的分离、筛选 | 第32-33页 |
| 2.2 降解菌株的菌落形态及生理生化特征 | 第33-34页 |
| 2.3 降解菌株的系统发育树分析 | 第34-35页 |
| 2.4 不同环境条件对菌株KS-1生长情况的影响 | 第35-38页 |
| 3 本章小结 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-41页 |
| 第三章 乙羧氟草醚降解菌株KS-1的降解特性、代谢途径以及降解底物谱的研究 | 第41-55页 |
| 1 材料与方法 | 第41-43页 |
| 1.1 菌株、试剂、培养基 | 第41页 |
| 1.2 菌种的培养与种子液的制备 | 第41页 |
| 1.3 菌株KS-1降解乙羧氟草醚降解曲线 | 第41-42页 |
| 1.4 不同影响因子对菌株KS-1降解乙羧氟草醚的影响 | 第42-43页 |
| 1.5 粗酶液的制备 | 第43页 |
| 1.6 乙羧氟草醚及其降解产物的提取与鉴定 | 第43页 |
| 1.7 菌株KS-1降解底物谱 | 第43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-53页 |
| 2.1 菌株KS-1降解乙羧氟草醚降解曲线的测定 | 第43-44页 |
| 2.2 不同影响因子对菌株KS-1降解乙羧氟草醚的影响的测定 | 第44-47页 |
| 2.3 粗酶效果的验证 | 第47-48页 |
| 2.4 菌株KS-1降解乙羧氟草醚的代谢途径的初步研究 | 第48-51页 |
| 2.5 菌株KS-1降解的底物谱 | 第51-53页 |
| 3 本章小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-55页 |
| 第四章 乙羧氟草醚酯酶基因(fluE)的克隆、表达及纯化 | 第55-75页 |
| 第一节 乙羧氟草醚酯酶基因的克隆 | 第55-62页 |
| 1 材料与方法 | 第55-59页 |
| 1.1 培养基与试剂 | 第55页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第55-56页 |
| 1.3 菌株总DNA的提取以及质粒DNA的提取 | 第56页 |
| 1.4 鸟枪法构建基因文库的路线图 | 第56-57页 |
| 1.5 菌株KS-1总DNA Sau3AI酶切以及酶切片段的回收 | 第57-58页 |
| 1.6 酶连与转化 | 第58页 |
| 1.7 菌株KS-1可降解乙羧氟草醚的阳性克隆子筛选及效果检测 | 第58-59页 |
| 1.8 阳性克隆子的基因序列分析与比对 | 第59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-62页 |
| 2.1 菌株KS-1总DNA的提取和Sau3 AI酶切 | 第59-60页 |
| 2.2 基因文库中阳性克隆子的筛选 | 第60页 |
| 2.3 阳性克隆子的测序以及ORF分析 | 第60-62页 |
| 2.4 fluE的核苷酸序列以及氨基酸序列分析 | 第62页 |
| 第二节 乙羧氟草醚酯酶FluE的表达与纯化 | 第62-73页 |
| 1 材料与方法 | 第62-69页 |
| 1.1 培养基与化学试剂 | 第62页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第62-63页 |
| 1.3 菌株总DNA的提取以及质粒DNA的提取 | 第63页 |
| 1.4 普通感受态细胞Escherichia coli BL21 (DE3)的制备 | 第63-64页 |
| 1.5 乙羧氟草醚酯酶基因的PCR扩增 | 第64-65页 |
| 1.6 PCR产物的纯化以及表达载体的构建 | 第65-66页 |
| 1.7 表达菌株的构建和诱导表达 | 第66-67页 |
| 1.8 FluE蛋白的纯化 | 第67-68页 |
| 1.9 乙羧氟草醚酯酶SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第68-69页 |
| 1.10 FluE的酶活测定 | 第69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-72页 |
| 2.1 FluE表达引物的扩增以及重组表达载体的构建 | 第69-70页 |
| 2.2 FluE酯酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第70-71页 |
| 2.3 FluE蛋白的纯化以及电泳分析 | 第71-72页 |
| 2.4 FluE的底物谱以及对应的动力学参数 | 第72页 |
| 3 本章小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-75页 |
| 全文总结 | 第75-77页 |
| 硕士论文创新点 | 第77-79页 |
| 附录Ⅰ 培养基及试剂配方 | 第79-81页 |
| 附录Ⅱ 基因及氨基酸序列 | 第81-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表或已接受的学术论文 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
