| 中文摘要 | 第6-7页 |
| 英文摘要 | 第7页 |
| 缩略词 | 第9-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-24页 |
| §1 引言 | 第10页 |
| §2 葡萄主要病毒病研究概况 | 第10-16页 |
| 2．1 葡萄病毒病的发生和危害特点 | 第11页 |
| 2．2 葡萄主要病毒病的种类、发生、分布、病原、症状、危害及传播途径 | 第11-16页 |
| 2．2．1 葡萄扇叶病 | 第11-13页 |
| 2．2．2 葡萄卷叶病 | 第13-15页 |
| 2．2．3 葡萄茎痘病 | 第15-16页 |
| 2．2．4 葡萄栓皮病 | 第16页 |
| §3 葡萄病毒病检测技术进展 | 第16-21页 |
| 3．1 指示植物法 | 第17页 |
| 3．2 光镜和电镜观察 | 第17-18页 |
| 3．3 血清学方法 | 第18页 |
| 3．4 分子生物学检测 | 第18-21页 |
| 3．4．1 核酸分子杂交技术 | 第19页 |
| 3．4．2 双链RNA（dsRNA）技术 | 第19-20页 |
| 3．4．3 反转录聚合酶链式反应 | 第20-21页 |
| 3．4．3．1 兼并引物PCR技术 | 第20页 |
| 3．4．3．2 免疫PCR技术 | 第20-21页 |
| 3．4．3．3 免疫捕捉PCR技术 | 第21页 |
| 3．4．3．4 PCR-ELISA定量分析技术 | 第21页 |
| 3．4．3．5 多重PCR | 第21页 |
| 3．4．3．6 原位PCR | 第21页 |
| §4 葡萄病毒病的预防和控制 | 第21-22页 |
| 4．1 抗性育种 | 第21-22页 |
| 4．2 交叉保护 | 第22页 |
| 4．3 防治传播介体 | 第22页 |
| 4．4 生产和使用无毒苗 | 第22页 |
| §5 本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二部分 实验研究 | 第24-43页 |
| §1 引言 | 第24-25页 |
| §2 材料和方法 | 第25-32页 |
| 2．1 葡萄组织总RNA提取 | 第25-27页 |
| 2．1．1 分步离心法 | 第25-26页 |
| 2．1．2 SDS法 | 第26页 |
| 2．1．3 CTAB法 | 第26-27页 |
| 2．2 RNA纯度及完整性检测 | 第27页 |
| 2．3 反转录合成cDNA第一链 | 第27-28页 |
| 2．3．1 引物 | 第27页 |
| 2．3．2 试剂 | 第27页 |
| 2．3．3 具体操作 | 第27-28页 |
| 2．4 RT-PCR扩增 | 第28页 |
| 2．5 PCR产物的克隆与序列分析 | 第28-32页 |
| 2．5．1 PCR产物的回收 | 第28页 |
| 2．5．2 PCR产物和载体的连接 | 第28-29页 |
| 2．5．3 质粒DNA的小量提取 | 第29-31页 |
| 2．5．4 感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2．5．5 转化大肠杆菌 | 第31页 |
| 2．5．6 重组质粒的筛选 | 第31-32页 |
| 2．5．7 重组质粒的酶切鉴定 | 第32页 |
| 2．5．8 重组质粒的PCR鉴定 | 第32页 |
| 2．5．9 PCR产物的序列测定与分析 | 第32页 |
| §3 结果与分析 | 第32-36页 |
| 3．1 不同RNA提取方法的比较 | 第32-33页 |
| 3．2 从感病组织不同部位提取RNA的比较 | 第33页 |
| 3．3 葡萄扇叶病和卷叶病的PT-PCR检测结果 | 第33-34页 |
| 3．4 重组质粒的筛选 | 第34页 |
| 3．5 重组质粒的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| 3．6 重组质粒的PCR检测 | 第35-36页 |
| 3．7 PCR产物的序列分析和 | 第36页 |
| §4 讨论 | 第36-42页 |
| 4．1 关于RNA的提取 | 第36-39页 |
| 4．2 关于PT-PCR | 第39-40页 |
| 4．2．1 PCR条件的选择 | 第39-40页 |
| 4．2．2 关于PCR产物的电泳检测 | 第40页 |
| 4．2．3 关于RT-PCR存在的问题 | 第40页 |
| 4．3 PCR产物的克隆和序列分析 | 第40-42页 |
| 4．3．1 PCR产物与载体的连接 | 第40-41页 |
| 4．3．2 重组质粒的筛选和鉴定 | 第41页 |
| 4．3．3 序列测定与分析 | 第41-42页 |
| §5 结论 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-52页 |
| 作者简介 | 第52页 |