| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 缩写、符号、术语表 | 第17-24页 |
| 引言 | 第24-27页 |
| 第一章 聚乙烯亚胺-胆固醇的合成及表征 | 第27-31页 |
| 1 材料与仪器 | 第27页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第27页 |
| 1.2 仪器 | 第27页 |
| 2 实验方法 | 第27-28页 |
| 2.1 聚乙烯亚胺—胆固醇的合成 | 第27-28页 |
| 2.2 核磁共振波谱(~1H-NMR)检测 | 第28页 |
| 2.3 红外光谱检测 | 第28页 |
| 3 结果与讨论 | 第28-30页 |
| 3.1 ~1H-NMR检测结果 | 第28-29页 |
| 3.2 红外光谱检测结果 | 第29-30页 |
| 4 小结 | 第30-31页 |
| 第二章 磷酸钙纳米粒的制备及表征 | 第31-41页 |
| 1 材料与仪器 | 第31页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第31页 |
| 1.2 仪器 | 第31页 |
| 2 实验方法 | 第31-33页 |
| 2.1 微乳法制备磷酸钙纳米粒 | 第31-32页 |
| 2.1.1 微乳液的制备及三元体系拟相图绘制 | 第31页 |
| 2.1.2 微乳法制备磷酸钙纳米粒 | 第31-32页 |
| 2.1.3 微乳法中去除有机相的后处理方法比较 | 第32页 |
| 2.2 共沉淀法制备磷酸钙纳米粒 | 第32页 |
| 2.2.1 共沉淀法制备磷酸钙纳米粒 | 第32页 |
| 2.2.2 共沉淀法制备磷酸钙纳米粒的影响因素考察 | 第32页 |
| 2.3 CaP NP的形态观察 | 第32-33页 |
| 2.4 CaP NP的粒径及电位测定 | 第33页 |
| 2.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| 3 结果与讨论 | 第33-39页 |
| 3.1 三元体系拟相图 | 第33-34页 |
| 3.2 共沉淀法制备磷酸钙纳米粒的影响因素考察 | 第34页 |
| 3.3 CaP NP的形态观察 | 第34-35页 |
| 3.4 CaP NP粒径及电位测定 | 第35-38页 |
| 3.5 两种制备方法的比较 | 第38页 |
| 3.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第38-39页 |
| 4 小结 | 第39-41页 |
| 第三章 聚阳离子脂质体/磷酸钙纳米粒复合载体的制备 | 第41-52页 |
| 1 材料与仪器 | 第41-42页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第41页 |
| 1.2 胞 | 第41页 |
| 1.3 仪器 | 第41-42页 |
| 2 实验方法 | 第42-43页 |
| 2.1 聚阳离子脂质体(PCL)的制备 | 第42页 |
| 2.2 聚阳离子脂质体/磷酸钙纳米粒复合载体(PLCP)的制备 | 第42页 |
| 2.3 PCL和PLCP的形态观察 | 第42页 |
| 2.4 PCL/siRNA和PLCP的表征 | 第42页 |
| 2.5 PLCP缓冲能力的测定 | 第42页 |
| 2.6 PLCP的细胞毒性实验 | 第42-43页 |
| 2.7 PLCP冻干保护剂的筛选 | 第43页 |
| 2.8 PLCP的体外转染实验 | 第43页 |
| 3 结果与讨论 | 第43-51页 |
| 3.1 PCL和PLCP的形态观察 | 第43-45页 |
| 3.2 PCL/siRNA和PLCP的表征 | 第45-46页 |
| 3.3 PLCP缓冲能力的测定 | 第46-47页 |
| 3.4 PLCP细胞毒性实验 | 第47-49页 |
| 3.5 PLCP冻干保护剂筛选 | 第49-50页 |
| 3.6 PLCP体外转染实验 | 第50-51页 |
| 4 小结 | 第51-52页 |
| 第四章 复合载体细胞摄取评价 | 第52-58页 |
| 1 材料与仪器 | 第52页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第52页 |
| 1.2 细胞 | 第52页 |
| 1.3 仪器 | 第52页 |
| 2 实验方法 | 第52-53页 |
| 2.1 不同载体的细胞摄取研究 | 第52-53页 |
| 2.2 不同N/P对PLCP细胞摄取的影响 | 第53页 |
| 2.3 DOPE对PLCP细胞摄取的影响 | 第53页 |
| 3 结果与讨论 | 第53-57页 |
| 3.1 不同载体的细胞摄取研究 | 第53-54页 |
| 3.2 不同N/P对PLCP细胞摄取的影响 | 第54-56页 |
| 3.3 DOPE对PLCP细胞摄取的影响 | 第56-57页 |
| 4 小结 | 第57-58页 |
| 第五章 复合载体介导的siRNA体外基因沉默研究 | 第58-78页 |
| 1 复合载体介导的anti-GFP siRNA体外基因沉默研究 | 第58-69页 |
| 1.1 材料与仪器 | 第58-59页 |
| 1.1.1 材料和试剂 | 第58页 |
| 1.1.2 细胞 | 第58页 |
| 1.1.3 仪器 | 第58-59页 |
| 1.2 实验方法 | 第59-60页 |
| 1.2.1 anti-GFP siRNA序列筛选 | 第59页 |
| 1.2.2 复合载体介导的anti-GFP siRNA体外基因沉默实验 | 第59-60页 |
| 1.2.2.1 细胞转染 | 第59-60页 |
| 1.2.2.2 总RNA的提取 | 第60页 |
| 1.2.2.3 RT-qPCR分析 | 第60页 |
| 1.3 结果与讨论 | 第60-68页 |
| 1.3.1 anti-GFP siRNA序列筛选 | 第60-66页 |
| 1.3.2 复合载体介导的anti-GFP siRNA体外基因沉默实验 | 第66-68页 |
| 1.4 小结 | 第68-69页 |
| 2 复合载体介导的VEGF siRNA体外基因沉默研究 | 第69-78页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第69-70页 |
| 2.1.1 材料和试剂 | 第69页 |
| 2.1.2 细胞 | 第69页 |
| 2.1.3 仪器 | 第69-70页 |
| 2.2 实验方法 | 第70-71页 |
| 2.2.1 细胞转染 | 第70页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第70页 |
| 2.2.3 RT-qPCR分析 | 第70-71页 |
| 2.2.4 WB测定VEGF蛋白表达 | 第71页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第71-76页 |
| 2.3.1 RT-qPCR法测定VEGF mRNA表达 | 第71-73页 |
| 2.3.2 Western blot测定VEGF蛋白表达 | 第73-76页 |
| 2.4 小结 | 第76-78页 |
| 第六章 复合载体介导的siRNA抗肿瘤实验研究 | 第78-91页 |
| 1 材料与仪器 | 第78-79页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第78页 |
| 1.2 细胞 | 第78页 |
| 1.3 动物 | 第78页 |
| 1.4 仪器 | 第78-79页 |
| 2 实验方法 | 第79-81页 |
| 2.1 主要试剂配制 | 第79页 |
| 2.2 裸鼠成瘤 | 第79页 |
| 2.3 实验分组及给药 | 第79-80页 |
| 2.4 皮下肿瘤体积及生长抑制率观察 | 第80页 |
| 2.5 免疫组织化学 | 第80-81页 |
| 2.6 微血管密度(MVD)测定 | 第81页 |
| 3 结果与讨论 | 第81-89页 |
| 3.1 PLCP介导的siRNA对肿瘤生长的作用 | 第81-84页 |
| 3.2 PLCP介导的siRNA对肿瘤血管形成的作用 | 第84-89页 |
| 4 小结 | 第89-91页 |
| 全文总结 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-98页 |
| 综述 | 第98-112页 |
| 参考文献 | 第106-112页 |
| 作者简历及在读期间所取得的科研成果 | 第112页 |
