| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 食线虫真菌及丝状真菌产孢调控基因的研究进展 | 第11-19页 |
| 1 食线虫真菌的研究概况 | 第11-13页 |
| 2 丝状真菌产生分生孢子的分子机制研究进展 | 第13-16页 |
| 3 本论文的选题依据及研究意义 | 第16-19页 |
| 第二章 寡孢节丛孢基因组中的产孢调控基因的筛选和分析 | 第19-25页 |
| 1 前言 | 第19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-20页 |
| 2.1 寡孢节丛孢基因组中产孢同源基因的筛选 | 第19-20页 |
| 2.2 fluG和abaA基因序列来源 | 第20页 |
| 2.3 寡孢节丛孢AoabaA和AofluG蛋白的同源性比较和结构域分析 | 第20页 |
| 2.4 系统进化分析 | 第20页 |
| 3 结果 | 第20-25页 |
| 3.1 寡孢节丛孢基因组中与构巢曲霉产孢相关的同源基因 | 第20-22页 |
| 3.2 产孢调控蛋白AofluG和AoabaA的分子量、等电点和功能结构域分析 | 第22-23页 |
| 3.3 产孢调控蛋白AofluG和AoabaA的系统进化分析 | 第23-25页 |
| 第三章 寡孢节丛孢产孢调控基因fluG和abaA的敲除和突变菌株的筛选和验证 | 第25-47页 |
| 1 前言 | 第25-27页 |
| 2 敲除载体的构建 | 第27-42页 |
| 2.1 实验菌株和载体 | 第27页 |
| 2.2 主要溶液及培养基 | 第27-28页 |
| 2.3 实验药品及试剂盒 | 第28-29页 |
| 2.4 主要仪器及设备 | 第29页 |
| 2.5 敲除引物设计 | 第29-30页 |
| 2.6 寡孢节丛孢基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.7 质粒pSCN44的提取 | 第31页 |
| 2.8 扩增目的片段 | 第31-33页 |
| 2.9 酵母感受态制备及电转 | 第33-34页 |
| 2.10 酵母转化子质粒提取 | 第34页 |
| 2.11 大肠杆菌感受态细胞的制备及电转化 | 第34-35页 |
| 2.12 大肠杆菌转化子验证 | 第35-36页 |
| 2.13 敲除载体全长片段扩增及回收 | 第36-37页 |
| 2.14 寡孢节丛孢原生质体的制备 | 第37页 |
| 2.15 寡孢节丛孢原生质体的转化 | 第37-38页 |
| 2.16 寡孢节丛孢敲除转化子基因组提取 | 第38页 |
| 2.17 敲除转化子的PCR验证 | 第38页 |
| 2.18 敲除转化子的Southern blot验证 | 第38-42页 |
| 3 敲除载体构建的实验结果 | 第42-45页 |
| 3.1 寡孢节丛孢fluG和abaA基因上游5'端和下游3'端片段及hph扩增 | 第42页 |
| 3.2 电转化酵母结果 | 第42-43页 |
| 3.3 大肠杆菌DH5α转化子质粒PCR结果 | 第43页 |
| 3.4 转化子的PCR验证 | 第43-44页 |
| 3.5 转化子的Southern blot验证 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 4.1 敲除载体的构建及原生质体制备及转化 | 第45页 |
| 4.2 转化子的PCR验证 | 第45-46页 |
| 4.3 转化子的Southern blot验证 | 第46-47页 |
| 第四章 寡孢节丛孢野生菌株与敲除突变菌株的表型特征比较 | 第47-57页 |
| 1 前言 | 第47页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第47-48页 |
| 2.1 实验菌株 | 第47页 |
| 2.2 主要培养基 | 第47-48页 |
| 2.3 主要药品 | 第48页 |
| 2.4 主要仪器及设备 | 第48页 |
| 3 实验方法 | 第48-49页 |
| 3.1 生长速率的比较 | 第48页 |
| 3.2 产孢的比较 | 第48页 |
| 3.2.1 产孢形态学特征比较 | 第48页 |
| 3.2.2 产孢子数量比较 | 第48页 |
| 3.3 产捕食器官比较 | 第48-49页 |
| 3.4 抗逆性比较 | 第49页 |
| 4 实验结果 | 第49-53页 |
| 4.1 生长速率比较 | 第49-51页 |
| 4.2 产孢的比较 | 第51-52页 |
| 4.2.1 产孢子数量比较 | 第51页 |
| 4.2.2 产孢形态学特征比较 | 第51-52页 |
| 4.3 产捕食器官(三维菌网)比较 | 第52页 |
| 4.4 抗逆性测试结果 | 第52-53页 |
| 5 讨论 | 第53-55页 |
| 5.1 生长速率的比较 | 第53-54页 |
| 5.2 产孢比较 | 第54页 |
| 5.3 产捕食器官比较 | 第54页 |
| 5.5 抗逆性比较 | 第54-55页 |
| 6 小结 | 第55-57页 |
| 第五章 寡孢节丛孢和两个突变株(A-8/F-16)的Real-Time PCR分析及A-8突变株的表达谱分析 | 第57-84页 |
| 1 前言 | 第57-58页 |
| 1.1 实验菌株 | 第58页 |
| 1.2 主要培养基 | 第58页 |
| 1.3 主要药品及试剂盒 | 第58页 |
| 1.4 主要仪器及设备 | 第58页 |
| 3 实验方法 | 第58-62页 |
| 3.1 寡孢节丛孢WT菌株及敲除株在产孢不同时间段样品总RNA的提取 | 第58-59页 |
| 3.1.1 WT菌株敲除株A-8和F-16在产孢不同时间段样品的获得 | 第58页 |
| 3.1.2 寡孢节丛孢及敲除菌株的总RNA提取 | 第58-59页 |
| 3.2 逆转录获取mRNA | 第59-60页 |
| 3.3 Real-Time PCR | 第60-61页 |
| 3.4 WT菌株和A-8菌株在产孢过程中不同时间点的数字表达谱分析 | 第61-62页 |
| 4 实验结果 | 第62-81页 |
| 4.1 野生型菌株诱导样品的相对定量 | 第62-66页 |
| 4.1.1 RNA提取结果 | 第62-63页 |
| 4.1.2 RT-PCR结果 | 第63-66页 |
| 4.2 基因表达谱结果 | 第66-81页 |
| 4.2.1 RNA提取及检测结果 | 第66页 |
| 4.2.2 Clean数据碱基组成和质量分布图 | 第66-68页 |
| 4.2.3 测序的整体质量评估 | 第68-70页 |
| 4.2.4 基因定量分析 | 第70-71页 |
| 4.2.5 PCA主成分分析 | 第71-72页 |
| 4.2.6 条件特异表达分析 | 第72页 |
| 4.2.7 差异表达基因筛选 | 第72-75页 |
| 4.2.8 差异基因表达模式聚类分析 | 第75-77页 |
| 4.2.9 差异基因的GO功能显著性富集分析 | 第77-79页 |
| 4.2.10 差异基因的Pathway显著性富集分析 | 第79-81页 |
| 5 讨论 | 第81-82页 |
| 6 小结 | 第82-84页 |
| 全文小结及展望 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-92页 |
| 附录 | 第92-97页 |
| 附录1 论文中使用的缩写及中英文对照 | 第92-93页 |
| 附录2 论文中使用的质粒图谱 | 第93-94页 |
| 附录3 RT-PCR结果 | 第94-96页 |
| 附录4 硕士阶段发表或参与撰写的论文 | 第96页 |
| 附录5 硕士阶段获得的奖励和荣誉 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
