| 前言 | 第4-6页 |
| 中文摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第1章 绪论 | 第19-32页 |
| 1.1 TPX2 的概念、结构与功能 | 第19-20页 |
| 1.2 TPX2 的作用机制 | 第20-22页 |
| 1.3 TPX2 与肿瘤发生的关系及相关研究进展 | 第22-24页 |
| 1.4 TPX2 与妇科肿瘤的研究现状和前景 | 第24页 |
| 1.5 RNA 干扰在肿瘤研究中的应用 | 第24-28页 |
| 1.6 高危型 HPV 感染与 TPX2 介导宫颈癌发生的相关细胞信号及其转导途经 | 第28-30页 |
| 1.7 本课题设计思路 | 第30-32页 |
| 第2章 TPX2 基因在宫颈癌中的表达及临床意义 | 第32-46页 |
| 2.1 材料和仪器 | 第32-34页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第32页 |
| 2.1.2 实验组织标本和细胞株 | 第32-33页 |
| 2.1.3 主要仪器和材料 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-39页 |
| 2.2.1 溶液的配制 | 第34页 |
| 2.2.2 实验分组设计 | 第34页 |
| 2.2.3 组织的收集 | 第34页 |
| 2.2.4 细胞的复苏和传代培养 | 第34-35页 |
| 2.2.5 总蛋白质的提取 | 第35页 |
| 2.2.6 BCA 法测定蛋白浓度 | 第35-36页 |
| 2.2.7 Western Blot 免疫印迹分析 | 第36-37页 |
| 2.2.8 总 RNA 的提取 | 第37页 |
| 2.2.9 RNA 纯度的测定和定量 | 第37页 |
| 2.2.10 cDNA 的合成和 PCR 反应 | 第37-38页 |
| 2.2.11 免疫组织化学法 | 第38页 |
| 2.2.12 统计学处理 | 第38-39页 |
| 2.3 结果 | 第39-43页 |
| 2.3.1 Western-Blot 免疫印迹分析检测 TPX2 蛋白在不同的宫颈癌细胞株及组织中的表达 | 第39页 |
| 2.3.2 Western-Blot 免疫印迹分析检测 TPX2 蛋白在宫颈癌发展过程中的变化情况 | 第39-40页 |
| 2.3.3 RT-PCR 检测正常宫颈组织和宫颈癌组织中 TPX2 mRNA 的表达 | 第40-41页 |
| 2.3.4 免疫组织化学检测 TPX2 在宫颈癌组织的表达与患者临床分期及预后的相关性 | 第41-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-45页 |
| 2.5 小结 | 第45-46页 |
| 第3章 小干扰 RNA 靶向沉默 TPX2 基因对宫颈鳞癌 SiHa 细胞的生物学影响 | 第46-57页 |
| 3.1 材料和仪器 | 第46-47页 |
| 3.1.1 实验细胞和试剂 | 第46页 |
| 3.1.2 主要仪器和材料 | 第46-47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 3.2.1 细胞的复苏和传代培养 | 第47-48页 |
| 3.2.2 实验分组 | 第48页 |
| 3.2.3 TPX2-siRNA 的构建 | 第48页 |
| 3.2.4 TPX2-siRNA 的转染 | 第48页 |
| 3.2.5 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第48-49页 |
| 3.2.6 MTT 法测定细胞增殖 | 第49页 |
| 3.2.7 Matrigel 侵袭试验 | 第49页 |
| 3.2.8 流式细胞仪分析细胞周期 | 第49页 |
| 3.2.9 统计学分析 | 第49页 |
| 3.3 结果 | 第49-54页 |
| 3.3.1 流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡 | 第49-51页 |
| 3.3.2 MTT 检测细胞增殖情况 | 第51-52页 |
| 3.3.3 Matrigel 侵袭试验 | 第52-53页 |
| 3.3.4 流式细胞仪分析细胞周期 | 第53-54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-56页 |
| 3.5 小结 | 第56-57页 |
| 第4章 TPX2-shRNA对人源宫颈腺癌细胞HeLa凋亡的影响及细胞信号转导通路的研究 | 第57-83页 |
| 4.1 实验材料、仪器和溶液 | 第57-58页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第57页 |
| 4.1.2 仪器与材料 | 第57页 |
| 4.1.3 溶液和培养基的配制 | 第57-58页 |
| 4.2 实验方法 | 第58-66页 |
| 4.2.1 重组真核表达载体 pLKO.1-EGFP-shRNA-TPX2 质粒的构建、筛选和鉴定 | 第58-60页 |
| 4.2.2 细胞培养及重组质粒的转染 | 第60-61页 |
| 4.2.3 实时定量 PCR（Quantitative Real Time PCR，qRT-PCR）检测各组 HeLa 细胞中 TPX2、p53、p21、Rb、E6 基因的 mRNA 表达量的变化 | 第61-64页 |
| 4.2.4 总蛋白质的提取 | 第64页 |
| 4.2.5 BCA 法测定蛋白浓度 | 第64页 |
| 4.2.6 Western-Blot 免疫印迹分析检测各组 HeLa 细胞中 TPX2、p53、 p21、Rb、E6 蛋白的表达量 | 第64-65页 |
| 4.2.7 MTT 法检测细胞增殖 | 第65-66页 |
| 4.2.8 流式细胞仪分析细胞周期 | 第66页 |
| 4.2.9 TUNEL 检测细胞内 DNA 片段化情况 | 第66页 |
| 4.2.10 统计学处理 | 第66页 |
| 4.3 结果 | 第66-79页 |
| 4.3.1 重组载体的成功构建和转染 | 第66-67页 |
| 4.3.2 实时定量 PCR 检测各基因表达水平 | 第67-73页 |
| 4.3.3 Western-Blot 免疫印迹分析法检测各基因表达的蛋白情况 | 第73-74页 |
| 4.3.4 MTT 检测细胞增殖情况 | 第74-75页 |
| 4.3.5 流式细胞仪分析细胞周期 | 第75-77页 |
| 4.3.6 原位末端标记法检测细胞凋亡 | 第77-79页 |
| 4.4 讨论 | 第79-81页 |
| 4.5 小结 | 第81-83页 |
| 第5章 结论和创新点 | 第83-85页 |
| 5.1 结论 | 第83-84页 |
| 5.2 创新点 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-93页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
