| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 剪切敏感型海洋灰绿曲霉HB1-19 | 第10-11页 |
| 1.2 曲霉属细胞壁 | 第11-14页 |
| 1.2.1 概述 | 第11页 |
| 1.2.2 包含呋喃半乳糖的糖复合物的生物合成 | 第11-13页 |
| 1.2.2.1 概述 | 第11页 |
| 1.2.2.2 UDP-呋喃半乳糖(UDP-Galf)的合成 | 第11-13页 |
| 1.2.2.3 UDP-呋喃半乳糖转运进入高尔基体 | 第13页 |
| 1.2.3 真核生物呋喃半乳糖(Galf)的生物重要性 | 第13-14页 |
| 1.3 构巢曲霉ugeA,ugtA和ugmA缺失菌株表型对比 | 第14-18页 |
| 1.3.1 模式生物构巢曲霉概述 | 第14页 |
| 1.3.2 构巢曲霉ugeA和ugmA单缺失菌株表型 | 第14-16页 |
| 1.3.3 构巢曲霉ugtA缺失株表型 | 第16-18页 |
| 1.4 基因沉默 | 第18-19页 |
| 1.5 本课题研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 第2章 海洋灰绿曲霉AgugeA,AgugmA和AgugtA的克隆与序列分析 | 第20-40页 |
| 2.1 前言 | 第20页 |
| 2.2 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.2.1 实验菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.2.2 主要实验试剂及试剂盒 | 第20页 |
| 2.2.3 培养基配方及培养条件 | 第20-21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-23页 |
| 2.3.1 灰绿曲霉HB1-19基因组提取 | 第21页 |
| 2.3.2 实验引物及PCR反应条件 | 第21-22页 |
| 2.3.3 灰绿曲霉HB1-19细胞壁合成相关基因克隆 | 第22-23页 |
| 2.3.4 灰绿曲霉HB1-19 RNA抽提及逆转录PCR | 第23页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第23-30页 |
| 2.4.1 AgugeA,AgugmA和AgugtA基因的克隆 | 第23-29页 |
| 2.4.2 AgugeA,AgugmA和AgugtA基因中内含子鉴定及序列结构分析 | 第29-30页 |
| 2.4.3 AgugeA,AgugmA和AgugtA进化树分析 | 第30页 |
| 2.5 小结 | 第30-40页 |
| 第3章 海洋灰绿曲霉ΔAgugeA,△AgugmA和ΔAgugtA菌株的构建 | 第40-53页 |
| 3.1 前言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.2.1 实验菌株和质粒 | 第40页 |
| 3.2.2 主要实验试剂及试剂盒 | 第40页 |
| 3.2.3 培养基配方及培养条件 | 第40-41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-43页 |
| 3.3.1 打靶载体构建策略 | 第41页 |
| 3.3.2 实验引物及PCR反应条件 | 第41-42页 |
| 3.3.3 灰绿曲霉HB1-19原生质体制备与转化 | 第42-43页 |
| 3.3.4 孢子PCR验证 | 第43页 |
| 3.3.5 转化子筛选 | 第43页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第43-51页 |
| 3.4.1 灰绿曲霉HB1-19中AgugtA,AgugmA和AgugeA基因打靶载体构建 | 第43-47页 |
| 3.4.1.1 打靶载体构建及双交换策略 | 第43-45页 |
| 3.4.1.2 上下游片段的获得以及打靶载体验证 | 第45-47页 |
| 3.4.2 ΔAgugeA,△AgugmA和△AgugtA菌株验证 | 第47-50页 |
| 3.4.3 UgeA蛋白抑制剂实验 | 第50-51页 |
| 3.5 小结 | 第51-53页 |
| 第4章 灰绿曲霉HB1-19AgugeA基因沉默 | 第53-64页 |
| 4.1 前言 | 第53页 |
| 4.2 实验材料 | 第53页 |
| 4.2.1 实验菌株和质粒 | 第53页 |
| 4.2.2 主要实验试剂及试剂盒 | 第53页 |
| 4.2.3 培养基配方及培养条件 | 第53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-57页 |
| 4.3.1 实验引物 | 第53-54页 |
| 4.3.2 灰绿曲霉HB1-19中AgugeA基因沉默质粒的构建 | 第54-57页 |
| 4.3.3 共转化沉默质粒和基因Quelling载体转化灰绿曲霉HB1-19原生质体 | 第57页 |
| 4.3.4 转化子的筛选与验证 | 第57页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第57-63页 |
| 4.4.1 共转化质粒(包括表达质粒和筛选质粒)验证结果 | 第57-58页 |
| 4.4.2 共转化基因沉默转化子验证结果 | 第58-60页 |
| 4.4.3 基因Quelling质粒pOEP和pOEGP的构建 | 第60-61页 |
| 4.4.4 Quelling菌株验证结果 | 第61-63页 |
| 4.5 小结 | 第63-64页 |
| 第5章 诱导型启动子PalcA调控下AgugeA基因功能分析 | 第64-68页 |
| 5.1 前言 | 第64页 |
| 5.2 实验材料 | 第64页 |
| 5.2.1 实验菌株和质粒 | 第64页 |
| 5.2.2 主要实验试剂及试剂盒 | 第64页 |
| 5.2.3 培养基配方及培养条件 | 第64页 |
| 5.3 实验方法 | 第64-66页 |
| 5.3.1 质粒构建策略及引物 | 第64-66页 |
| 5.3.2 原生质体制备与转化 | 第66页 |
| 5.3.3 转化子验证 | 第66页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第66页 |
| 5.5 小结 | 第66-68页 |
| 第6章 结论与展望 | 第68-70页 |
| 6.1 主要结论 | 第68-69页 |
| 6.2 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
