| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 前言 | 第10-23页 |
| 1.1 甘露聚糖酶 | 第10-21页 |
| 1.1.1 甘露聚糖的介绍 | 第10-13页 |
| 1.1.2 甘露聚糖酶的分类 | 第13页 |
| 1.1.3 甘露聚糖酶的来源 | 第13-14页 |
| 1.1.4 甘露聚糖酶的作用机制 | 第14-16页 |
| 1.1.5 甘露聚糖酶研究概况 | 第16-19页 |
| 1.1.6 甘露聚糖酶的应用 | 第19-21页 |
| 1.1.6.1 用作清洁剂的添加成分 | 第19页 |
| 1.1.6.2 用于纸浆和造纸漂白 | 第19-20页 |
| 1.1.6.3 用作鱼粮添加剂 | 第20页 |
| 1.1.6.4 用于控制流体黏度 | 第20页 |
| 1.1.6.5 用于咖啡提取物的水解 | 第20页 |
| 1.1.6.6 用于改善动物饲料 | 第20页 |
| 1.1.6.7 其他应用 | 第20-21页 |
| 1.2 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第21页 |
| 1.3 课题意义与研究内容 | 第21-23页 |
| 第2章 Bacillus sp.甘露聚糖酶man_B的基因克隆及重组质粒的构建 | 第23-42页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-28页 |
| 2.2.1 菌种和质粒 | 第23-25页 |
| 2.2.2 试剂盒和工具酶 | 第25-26页 |
| 2.2.3 培养基和溶液 | 第26-27页 |
| 2.2.4 试剂和仪器 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-41页 |
| 2.3.1 主要实验技术 | 第28-31页 |
| 2.3.1.1 细菌基因组的提取 | 第28页 |
| 2.3.1.2 细菌质粒DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.3.1.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| 2.3.1.4 核酸电泳凝胶回收 | 第29-30页 |
| 2.3.1.5 大肠杆菌感受态制备 | 第30页 |
| 2.3.1.6 TA克隆 | 第30页 |
| 2.3.1.7 枯草芽孢杆菌感受态制备及转化 | 第30-31页 |
| 2.3.2 man_B基因的克隆和序列分析 | 第31-34页 |
| 2.3.2.1 简并PCR扩增保守序列 | 第31-33页 |
| 2.3.2.2 基因走读和序列拼接 | 第33页 |
| 2.3.2.3 全长基因的获得 | 第33页 |
| 2.3.2.4 TA克隆和菌落PCR鉴定 | 第33页 |
| 2.3.2.5 序列分析 | 第33-34页 |
| 2.3.3 重组表达质粒的构建 | 第34页 |
| 2.3.3.1 连接克隆载体和目的基因 | 第34页 |
| 2.3.3.2 酶切重组克隆载体和表达载体 | 第34页 |
| 2.3.3.3 连接酶切产物并转化 | 第34页 |
| 2.3.4 结果与讨论 | 第34-41页 |
| 2.3.4.1 甘露聚糖酶的全长基因 | 第34-40页 |
| 2.3.4.2 重组表达载体 | 第40-41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41-42页 |
| 第3章 甘露聚糖酶的表达,纯化和酶学性质的研究 | 第42-62页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料 | 第42-45页 |
| 3.2.1 菌种和质粒 | 第42页 |
| 3.2.2 试剂盒和工具酶 | 第42页 |
| 3.2.3 培养基和溶液 | 第42-44页 |
| 3.2.4 试剂和仪器 | 第44-45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-61页 |
| 3.3.1 主要实验技术 | 第45-49页 |
| 3.3.1.1 SDS-PAGE | 第46页 |
| 3.3.1.2 Bradford法测定蛋白浓度 | 第46-47页 |
| 3.3.1.3 DNS法测定酶活 | 第47-49页 |
| 3.3.1.4 亲和层析纯化重组蛋白 | 第49页 |
| 3.3.2 目的蛋白的表达和纯化 | 第49-50页 |
| 3.3.2.1 重组菌的构建 | 第49页 |
| 3.3.2.2 重组蛋白的诱导表达 | 第49页 |
| 3.3.2.3 重组蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 3.3.3 酶学性质的研究 | 第50-51页 |
| 3.3.3.1 酶反应动力学参数测定 | 第50页 |
| 3.3.3.2 温度和pH对酶活的影响 | 第50页 |
| 3.3.3.3 金属离子和化学试剂对酶活的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.3.4 蛋白酶对酶活的影响 | 第51页 |
| 3.3.4 结果与讨论 | 第51-61页 |
| 3.3.4.1 目的蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第51-53页 |
| 3.3.4.2 目的蛋白在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第53-55页 |
| 3.3.4.3 酶反应动力学参数 | 第55-56页 |
| 3.3.4.4 温度和pH对酶活的影响 | 第56-59页 |
| 3.3.4.5 金属离子和化学物质对酶活的影响 | 第59-60页 |
| 3.3.4.6 蛋白酶对酶活的影响 | 第60-61页 |
| 3.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第4章 结论和展望 | 第62-64页 |
| 4.1 结论 | 第62页 |
| 4.2 不足与展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72页 |