| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 顶复门类原虫入侵机制的研究概述 | 第12页 |
| 1.2 凝血酶敏感素相关无名蛋白的研究进展 | 第12-23页 |
| 1.2.1 凝血酶敏感素相关无名蛋白的概述 | 第13-15页 |
| 1.2.2 顶复门类原虫中凝血酶敏感素相关无名蛋白的生物学功能研究 | 第15-19页 |
| 1.2.3 凝血酶敏感素相关无名蛋白的晶体结构概述 | 第19-20页 |
| 1.2.4 凝血酶敏感素相关无名蛋白的生物学作用 | 第20-23页 |
| 2 研究的背景与目的意义 | 第23-26页 |
| 2.1 研究背景 | 第23-24页 |
| 2.2 研究目的 | 第24-26页 |
| 3 材料与方法 | 第26-44页 |
| 3.1 试验材料 | 第26-30页 |
| 3.1.1 虫株、血清和试验动物 | 第26页 |
| 3.1.2 菌种与质粒 | 第26页 |
| 3.1.3 酶和主要试剂 | 第26-27页 |
| 3.1.4 抗生素和培养基的配制 | 第27页 |
| 3.1.5 主要溶液的配制 | 第27-30页 |
| 3.1.6 仪器和设备 | 第30页 |
| 3.2 试验方法 | 第30-44页 |
| 3.2.1 生物信息学分析方法和工具 | 第30-31页 |
| 3.2.2 引物的设计 | 第31-32页 |
| 3.2.3 东方巴贝斯虫基因组DNA的提取 | 第32页 |
| 3.2.4 东方巴贝斯虫TRAP2基因及截短结构域的PCR扩增和克隆测序 | 第32-34页 |
| 3.2.5 系统进化分析 | 第34-35页 |
| 3.2.6 东方巴贝斯虫总RNA的提取 | 第35页 |
| 3.2.7 RT-PCR扩增东方巴贝斯虫TRAP2基因的结构域 | 第35-36页 |
| 3.2.8 重组表达质粒的构建 | 第36页 |
| 3.2.9 重组蛋白的原核表达及纯化 | 第36-39页 |
| 3.2.10 水牛红细胞膜蛋白的获取 | 第39页 |
| 3.2.11 多克隆血清的制备及多克隆抗体的纯化 | 第39-40页 |
| 3.2.12 Far-western bloting | 第40页 |
| 3.2.13 TRAP2重组蛋白及其结构域与肝素的粘附结合 | 第40-41页 |
| 3.2.14 TRAP2重组蛋白与肝素的竞争抑制实验 | 第41页 |
| 3.2.15 TRAP2重组蛋白及其结构域与肝素的亲和力大小比较 | 第41-42页 |
| 3.2.16 TRAP2重组蛋白分子筛仪器的纯化 | 第42-43页 |
| 3.2.17 TRAP2重组蛋白分子筛纯化后晶体的初筛 | 第43-44页 |
| 4 结果与分析 | 第44-62页 |
| 4.1 BoTRAP2基因的序列扩增及测定 | 第44-49页 |
| 4.1.1 TRAP2基因的PCR扩增 | 第44页 |
| 4.1.2 TRAP2基因序列的测定 | 第44-46页 |
| 4.1.3 TRAP2序列的比对和分子进化分析 | 第46-47页 |
| 4.1.4 TRAP2序列的生物信息学分析 | 第47-49页 |
| 4.2 东方巴贝斯虫TRAP2截短结构域重组蛋白的表达、纯化 | 第49-54页 |
| 4.2.1 TRAP2-TSP-vWFA短肽蛋白的表达、纯化及抗原性 | 第49-54页 |
| 4.2.2 TRA2-vWFA及TRA2-TSP短肽蛋白的表达、纯化 | 第54页 |
| 4.3 TRAP2-vWFA-TSP短肽蛋白多克隆抗体的制备及纯化 | 第54-55页 |
| 4.4 TRAP2-vWFA-TSP短肽蛋白与红细胞膜蛋白的互作 | 第55-56页 |
| 4.5 TRAP2-vWFA-TSP短肽蛋白与肝素的特异性结合 | 第56-60页 |
| 4.5.1 ELISA验证TRAP2-vWFA-TSP短肽蛋白与肝素的结合 | 第56-57页 |
| 4.5.2 ELISA验证TRAP2-vWFA-TSP短肽蛋白与肝素的粘附抑制 | 第57页 |
| 4.5.3 金属离子对TRAP2-vWFA-TSP短肽蛋白与肝素结合的影响 | 第57-58页 |
| 4.5.4 TRAP2-vWFA-TSP蛋白及其结构域与肝素粘附亲和力比较 | 第58-60页 |
| 4.6 TRAP2-vWFA-TSP短肽蛋白结晶条件的探索 | 第60-62页 |
| 4.6.1 TRAP2-vWFA-TSP短肽蛋白分子筛纯化 | 第60-61页 |
| 4.6.2 TRAP2-vWFA-TSP短肽蛋白结晶条件的筛选 | 第61-62页 |
| 5 讨论 | 第62-68页 |
| 5.1 东方巴贝斯虫TRAP2基因的克隆及测序分析 | 第62-63页 |
| 5.2 东方巴贝斯虫TRAP2截短蛋白的表达及功能验证 | 第63-66页 |
| 5.3 东方巴贝斯虫TRAP2截短蛋白晶体的初筛 | 第66-68页 |
| 6 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 附录1 | 第81-83页 |
| 附录2 | 第83页 |
