| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 1 引言 | 第12-30页 |
| 1.1 凤梨 | 第12-13页 |
| 1.2 乙烯及其信号途径 | 第13-17页 |
| 1.2.1 乙烯及其衍生物 | 第13-14页 |
| 1.2.2 乙烯信号途径 | 第14-15页 |
| 1.2.3 AP2/EREBP家族 | 第15-17页 |
| 1.3 开花 | 第17-25页 |
| 1.3.1 赤霉素途径 | 第18-19页 |
| 1.3.2 自主途径 | 第19-20页 |
| 1.3.3 光周期途径 | 第20-21页 |
| 1.3.4 春化途径 | 第21-22页 |
| 1.3.5 成花抑制途径 | 第22页 |
| 1.3.6 microRNAs与时期转变 | 第22-25页 |
| 1.4 凤梨乙烯催花的前期探索 | 第25-27页 |
| 1.5 研究背景及目的意义 | 第27-29页 |
| 1.6 技术路线 | 第29-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-53页 |
| 2.1 转录组文库的构建与分析 | 第30-36页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第30页 |
| 2.1.2 总RNA的提取与纯化 | 第30-31页 |
| 2.1.3 转录组的高通量测序 | 第31-32页 |
| 2.1.4 数据装配 | 第32-33页 |
| 2.1.5 功能注释与分类 | 第33页 |
| 2.1.6 CDS预测 | 第33-34页 |
| 2.1.7 目的基因的筛选 | 第34页 |
| 2.1.8 比较转录组中基因表达量注释和差异表达基因的筛选 | 第34-35页 |
| 2.1.9 半定量RT-PCR验证 | 第35-36页 |
| 2.2 目的基因的克隆 | 第36-40页 |
| 2.2.1 所需载体和菌种 | 第36页 |
| 2.2.2 基因RACE | 第36-39页 |
| 2.2.3 PCR产物的T/A克隆与测序 | 第39-40页 |
| 2.3 基因的GeXP分析(Multiplex RT-PCR analysis) | 第40-45页 |
| 2.3.1 实验材料 | 第40页 |
| 2.3.2 所需试剂 | 第40-41页 |
| 2.3.3 样品RNA的提取 | 第41页 |
| 2.3.4 GeXP技术原理 | 第41-42页 |
| 2.3.5 多重引物设计和优化 | 第42-43页 |
| 2.3.6 制备引物溶液 | 第43页 |
| 2.3.7 反转录反应 | 第43页 |
| 2.3.8 PCR反应 | 第43-44页 |
| 2.3.9 GeXP上样 | 第44页 |
| 2.3.10 表达量分析 | 第44-45页 |
| 2.4 开花相关miRNAs的筛选与克隆 | 第45-53页 |
| 2.4.1 材料与方法 | 第45页 |
| 2.4.2 所需的数据及工具 | 第45页 |
| 2.4.3 从转录组文库中获取miRNAs相关序列 | 第45-46页 |
| 2.4.4 相关引物的设计 | 第46-49页 |
| 2.4.5 成熟miRNAs及其靶基因的PCR检测 | 第49-51页 |
| 2.4.6 开花相关miRNAs的Realtime-PCR表达分析 | 第51-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-98页 |
| 3.1 转录组文库分析结果 | 第53-66页 |
| 3.1.1 RNA质量检测 | 第53页 |
| 3.1.2 组装数据的统计分析 | 第53-55页 |
| 3.1.3 基因注释与CDS预测 | 第55页 |
| 3.1.4 乙烯信号途径基因及开花相关基因的筛选 | 第55-57页 |
| 3.1.5 Unigene表达差异的生物信息学分析 | 第57-60页 |
| 3.1.6 开花相关差异表达基因的筛选 | 第60-65页 |
| 3.1.7 ERF转录因子的筛选 | 第65页 |
| 3.1.8 半定量RT-PCR验证生物信息学分析的结果 | 第65-66页 |
| 3.2 目的基因的克隆与序列分析 | 第66-72页 |
| 3.2.1 获得的基因全长 | 第66-70页 |
| 3.2.2 一个AP2-like基因的可变剪切 | 第70-72页 |
| 3.3 GeXP结果与分析 | 第72-87页 |
| 3.3.1 乙烯信号途径 | 第72-73页 |
| 3.3.2 光周期途径 | 第73-74页 |
| 3.3.3 赤霉素途径 | 第74-75页 |
| 3.3.4 自主途径 | 第75页 |
| 3.3.5 开花信号整合基因 | 第75-76页 |
| 3.3.6 花分生组织决定基因 | 第76-78页 |
| 3.3.7 开花抑制因子 | 第78-79页 |
| 3.3.8 miR156靶基因 | 第79-80页 |
| 3.3.9 miR172靶基因 | 第80-81页 |
| 3.3.10 花器官分化基因 | 第81-82页 |
| 3.3.11 AP2/EREBP家族 | 第82-86页 |
| 3.3.12 其它SPL转录因子 | 第86页 |
| 3.3.13 剩余其它基因 | 第86-87页 |
| 3.4 开花相关miRNAs的序列与表达分析 | 第87-98页 |
| 3.4.1 开花相关miRNAs的筛选与鉴定 | 第87-91页 |
| 3.4.2 开花相关miRNAs的Real-Time PCR差异表达分析 | 第91-98页 |
| 4 讨论 | 第98-104页 |
| 5 结论 | 第104-105页 |
| 6 创新点 | 第105页 |
| 7 后续工作 | 第105-107页 |
| 8 参考文献 | 第107-122页 |
| 附录 | 第122-146页 |
| 1 RACE所用引物 | 第122-134页 |
| 2 GeXP分析所用引物 | 第134-143页 |
| 3 英文缩略表 | 第143-146页 |
| 4 读博期间发表论文 | 第146页 |
