| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 产油微生物概况 | 第11-14页 |
| 1.1.1 概况 | 第11-12页 |
| 1.1.2 产油微生物的用途 | 第12-14页 |
| 1.2 产油微生物的油脂积累机制 | 第14-17页 |
| 1.2.1 产油微生物油脂积累的一般过程 | 第14-15页 |
| 1.2.2 苹果酸酶在油脂积累过程中的作用 | 第15-16页 |
| 1.2.3 ATP 柠檬酸裂解酶（ACL）在油脂积累过程中的作用 | 第16-17页 |
| 1.3 耶氏解脂酵母简介 | 第17-18页 |
| 1.4 耶氏解脂酵母油脂积累的研究进展 | 第18-22页 |
| 1.4.1 耶氏解脂酵母油脂积累的机制 | 第18-20页 |
| 1.4.2 耶氏解脂酵母的遗传改造 | 第20-22页 |
| 1.5 本课题的立题意义和主要研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 苹果酸酶酶学特性及其与油脂积累的非相关性 | 第24-37页 |
| 2.1 前言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.2.1 实验所用菌株和质粒 | 第24-25页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第25页 |
| 2.2.3 培养基和相关溶液 | 第25页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-29页 |
| 2.3.1 耶氏解脂酵母重组苹果酸酶的表达和纯化 | 第26-27页 |
| 2.3.2 重组苹果酸酶酶学特性的测定 | 第27页 |
| 2.3.3 高山被孢霉苹果酸酶在耶氏解脂酵母中表达质粒的构建 | 第27-28页 |
| 2.3.4 耶氏解脂酵母感受态的制备和乙酸锂转化 | 第28页 |
| 2.3.5 耶氏解脂酵母基因组的提取与转化子的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.6 重组耶氏解脂酵母的培养与生物量的测定 | 第29页 |
| 2.3.7 酵母转化子的蛋白质提取和苹果酸酶活性测定 | 第29页 |
| 2.3.8 脂肪酸的提取与分析 | 第29页 |
| 2.3.9 数据统计与分析 | 第29页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第29-36页 |
| 2.4.1 重组苹果酸酶的表达和纯化 | 第29-30页 |
| 2.4.2 重组苹果酸酶的酶学特性 | 第30-32页 |
| 2.4.3 中间代谢产物对重组苹果酸酶活性的影响 | 第32-33页 |
| 2.4.4 耶氏解脂酵母苹果酸酶蛋白质序列分析 | 第33-34页 |
| 2.4.5 耶氏解脂酵母苹果酸酶表达重组菌株的构建 | 第34页 |
| 2.4.6 高山被孢霉苹果酸酶在耶氏解脂酵母中表达对其油脂积累的影响 | 第34-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 G6PD、6PGD 和 NADP-ICDH 过表达对耶氏解脂酵母油脂积累的影响 | 第37-46页 |
| 3.1 前言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.2.1 实验所用菌株和质粒 | 第37-38页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第38页 |
| 3.2.3 培养基和相关溶液 | 第38页 |
| 3.2.4 主要实验仪器 | 第38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-42页 |
| 3.3.1 耶氏解脂酵母重组表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.2 耶氏解脂酵母 G6PD、6PGD 和 NADP-ICDH 过表达重组菌株的构建 | 第39-40页 |
| 3.3.3 耶氏解脂酵母重组菌株的培养 | 第40-41页 |
| 3.3.4 耶氏解脂酵母重组菌株生物量和油脂含量的检测 | 第41页 |
| 3.3.5 耶氏解脂酵母重组菌株细胞内酶活性的测定 | 第41-42页 |
| 3.3.6 数据统计与分析 | 第42页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第42-45页 |
| 3.4.1 耶氏解脂酵母重组表达载体的构建 | 第42页 |
| 3.4.2 耶氏解脂酵母 G6PD、6PGD 和 NADP-ICDH 过表达重组菌株的构建 | 第42-43页 |
| 3.4.3 耶氏解脂酵母重组菌株酶活性的测定 | 第43-44页 |
| 3.4.4 耶氏解脂酵母重组菌株生物量、油脂含量和脂肪酸组成的变化 | 第44-45页 |
| 3.5 本章小结 | 第45-46页 |
| 第四章 基于~(13)C 葡萄糖的耶氏解脂酵母代谢流分析 | 第46-60页 |
| 4.1 前言 | 第46页 |
| 4.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 4.2.1 实验所用菌株 | 第46页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第46-47页 |
| 4.2.3 培养基和相关溶液 | 第47页 |
| 4.2.4 主要实验仪器 | 第47页 |
| 4.3 实验方法 | 第47-55页 |
| 4.3.1 耶氏解脂酵母的培养 | 第47页 |
| 4.3.2 耶氏解脂酵母生物质的测定 | 第47-49页 |
| 4.3.3 代谢网络的构建 | 第49-50页 |
| 4.3.4 代谢流分布的计算 | 第50页 |
| 4.3.5 ~(13)C 代谢流量分析 | 第50-54页 |
| 4.3.6 数据统计与分析 | 第54-55页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第55-59页 |
| 4.4.1 耶氏解脂酵母生长特性 | 第55-56页 |
| 4.4.2 耶氏解脂酵母的生物质组成 | 第56-58页 |
| 4.4.3 耶氏解脂酵母13C 代谢流分析结果 | 第58-59页 |
| 4.5 本章小结 | 第59-60页 |
| 第五章 小鼠 ATP 柠檬酸裂解酶在耶氏解脂酵母中过表达对油脂含量的影响 | 第60-71页 |
| 5.1 前言 | 第60-61页 |
| 5.2 实验材料 | 第61-62页 |
| 5.2.1 实验所用质粒和菌株 | 第61-62页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第62页 |
| 5.2.3 培养基和相关溶液 | 第62页 |
| 5.2.4 主要实验仪器 | 第62页 |
| 5.3 实验方法 | 第62-65页 |
| 5.3.1 耶氏解脂酵母重组表达载体的构建 | 第62-63页 |
| 5.3.2 小鼠 ACL 在耶氏解脂酵母中过表达重组菌株的构建 | 第63页 |
| 5.3.3 小鼠 ACL 在耶氏解脂酵母基因组中拷贝数检测 | 第63页 |
| 5.3.4 ACL 的 Western bloting 和体外活性检测 | 第63-64页 |
| 5.3.5 重组耶氏解脂酵母的培养，生物量和油脂含量的检测 | 第64页 |
| 5.3.6 培养液中柠檬酸的检测 | 第64-65页 |
| 5.3.7 数据统计与分析 | 第65页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第65-70页 |
| 5.4.1 耶氏解脂酵母重组表达载体的构建 | 第65页 |
| 5.4.2 小鼠 ACL 在耶氏解脂酵母过表达重组菌株的构建 | 第65-66页 |
| 5.4.3 小鼠 ACL 在耶氏解脂酵母基因组中的拷贝数 | 第66-67页 |
| 5.4.4 小鼠 ACL 在耶氏解脂酵母的蛋白质表达水平和体外 ACL 活性比较 | 第67页 |
| 5.4.5 小鼠 ACL 在耶氏解脂酵母中过表达对生物量和油脂含量的影响 | 第67-69页 |
| 5.4.6 小鼠 ACL 在耶氏解脂酵母中过表达对培养基中柠檬酸的影响 | 第69页 |
| 5.4.7 ACL 在油脂积累和柠檬酸分泌中的作用 | 第69-70页 |
| 5.5 本章小结 | 第70-71页 |
| 主要结论与创新点 | 第71-73页 |
| 主要结果 | 第71-72页 |
| 主要结论 | 第72页 |
| 创新点 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 附录Ⅰ：耶氏解脂酵母代谢流分析的主要生物化学反应 | 第84-88页 |
| 附录Ⅱ: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第88页 |
