| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 引言 | 第11-24页 |
| ·果胶 | 第11-12页 |
| ·果胶在自然界中的分布 | 第11页 |
| ·果胶的结构和化学组成 | 第11页 |
| ·聚半乳糖醛酸 | 第11-12页 |
| ·聚鼠李半乳糖醛酸及有取代基的聚半乳糖醛酸 | 第12页 |
| ·聚半乳糖醛酸酶 | 第12-17页 |
| ·聚半乳糖醛酸酶的结构和功能 | 第17-19页 |
| ·微生物来源的聚半乳糖醛酸酶基因间的同源性比较 | 第19-20页 |
| ·聚半乳糖醛酸酶的用途 | 第20-21页 |
| ·果蔬汁的生产和果酒的澄清 | 第20页 |
| ·废水处理 | 第20页 |
| ·饲料行业 | 第20-21页 |
| ·生物农药 | 第21页 |
| ·巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达体系 | 第21-23页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统表达系统的优点 | 第21-22页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统表达载体 | 第22页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统局限性及解决策略 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 聚半乳糖醛酸酶产生菌的筛选 | 第24-30页 |
| ·材料与方法 | 第24-27页 |
| ·样品、菌株和质粒 | 第24页 |
| ·工具酶和试剂 | 第24页 |
| ·实验仪器 | 第24页 |
| ·培养基及相关溶液配制 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25页 |
| ·菌株鉴定 | 第25-27页 |
| ·结果 | 第27-29页 |
| ·菌株富集培养和筛选 | 第27页 |
| ·菌种鉴定 | 第27-29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| 3 聚半乳糖醛酸酶基因的克隆 | 第30-46页 |
| ·材料与方法 | 第30-37页 |
| ·菌种和质粒 | 第30页 |
| ·工具酶和试剂 | 第30页 |
| ·实验仪器 | 第30页 |
| ·培养基和相关溶液配制 | 第30-31页 |
| ·所用引物序列 | 第31页 |
| ·青霉菌 Penicillium sp. FJ2 基因组 DNA 的提取 | 第31页 |
| ·聚半乳糖醛酸酶基因全长的扩增策略 | 第31-36页 |
| ·聚半乳糖醛酸酶pgp1 基因cDNA 全长的克隆 | 第36-37页 |
| ·聚半乳糖醛酸酶基因pgp1 的序列分析及相似性比较 | 第37页 |
| ·重组蛋白 PGP1 同源建模分析 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-45页 |
| ·聚半乳糖醛酸酶序列比对及保守区简并引物的设计 | 第37-39页 |
| ·聚半乳糖醛酸酶cDNA 序列pgp1 的获取 | 第39-41页 |
| ·聚半乳糖醛酸酶基因pgp1 的序列分析及相似性比较 | 第41-44页 |
| ·重组蛋白 PGP1 同源建模分析 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 4 聚半乳糖醛酸酶基因的表达 | 第46-59页 |
| ·材料与方法 | 第46-51页 |
| ·菌种和质粒 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·试剂及仪器 | 第46-47页 |
| ·聚半乳糖醛酸酶酶活力测定方法 | 第47页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建及诱导表达 | 第47页 |
| ·PGP1 包涵体的溶解 | 第47-48页 |
| ·包涵体的重折叠 | 第48页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第48页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·酵母转化 | 第49-50页 |
| ·产内切聚半乳糖醛酸酶重组毕赤酵母的初筛 | 第50页 |
| ·产聚半乳糖醛酸酶重组毕赤酵母的复筛 | 第50页 |
| ·摇床水平各转化子聚半乳糖醛酸酶的表达 | 第50页 |
| ·发酵罐水平聚半乳糖醛酸酶的表达 | 第50-51页 |
| ·毕赤酵母表达的PGP1 蛋白糖基化分析 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-57页 |
| ·聚半乳糖醛酸酶活性测定 | 第51-52页 |
| ·聚半乳糖醛酸酶cDNA 重组质粒的鉴定 | 第52-53页 |
| ·pgp1 基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第53页 |
| ·PGP1 包涵体的溶解和重折叠 | 第53-54页 |
| ·pgp1 基因在毕赤酵母表达系统中的诱导表达 | 第54-56页 |
| ·毕赤酵母表达的PGP1 糖基化分析 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 5 聚半乳糖醛酸酶 PGP1 酶学性质的分析 | 第59-65页 |
| ·材料与方法 | 第59-60页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-60页 |
| ·结果 | 第60-62页 |
| ·重组酶蛋白 PGP1 的纯化 | 第60-61页 |
| ·PGP1 酶学性质的测定 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 6 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第72-73页 |
| 作者简历 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 中文详细摘要 | 第75-77页 |
