| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 米曲霉简介 | 第11-12页 |
| 1.2 丝状真菌遗传转化系统 | 第12-16页 |
| 1.2.1 筛选标记 | 第12-14页 |
| 1.2.2 转化方法 | 第14-16页 |
| 1.2.4 转化子的稳定性 | 第16页 |
| 1.3 基因敲除 | 第16-18页 |
| 1.3.1 基因敲除技术及其历史 | 第16-17页 |
| 1.3.2 同源重组(Homologous Recombination HR)的机理 | 第17页 |
| 1.3.3 打靶载体构建策略 | 第17-18页 |
| 1.3.4 提高打靶效率的策略 | 第18页 |
| 1.4 丝状真菌原生质体制备和再生的影响因素 | 第18-22页 |
| 1.4.1 制备材料 | 第18-19页 |
| 1.4.2 菌龄 | 第19页 |
| 1.4.3 酶种类 | 第19页 |
| 1.4.4 酶浓度 | 第19-20页 |
| 1.4.5 酶解时间 | 第20页 |
| 1.4.6 酶解温度 | 第20页 |
| 1.4.7 酶解液pH | 第20页 |
| 1.4.8 渗透压稳定剂 | 第20-21页 |
| 1.4.9 预处理方式 | 第21页 |
| 1.4.10 其他影响因素 | 第21-22页 |
| 1.5 主要研究的内容和意义 | 第22-23页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第22页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第22-23页 |
| 第2章 米曲霉原生质体制备和再生条件的优化 | 第23-39页 |
| 2.1 材料、仪器与试剂 | 第23-25页 |
| 2.1.1 菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 | 第23页 |
| 2.1.3 酶试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 缓冲液、化学试剂与培养基 | 第24-25页 |
| 2.2 试验方法与步骤 | 第25-28页 |
| 2.2.1 菌丝体的培养 | 第25-26页 |
| 2.2.2 酶解液的配制 | 第26页 |
| 2.2.3 原生质体的制备 | 第26-28页 |
| 2.2.4 原生质体的再生 | 第28页 |
| 2.3 结果 | 第28-36页 |
| 2.3.1 原生质体的形态观察 | 第28-30页 |
| 2.3.2 原生质体制备和再生条件的优化 | 第30-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-38页 |
| 2.4.1 原生质体制备的主要影响因素 | 第36-38页 |
| 2.5 本章小结 | 第38-39页 |
| 第3章 米曲霉pyrG缺失株的构建 | 第39-65页 |
| 3.1 仪器与试剂 | 第39-43页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第39-40页 |
| 3.1.2 主要仪器与设备 | 第40页 |
| 3.1.3 酶试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.4 缓冲液、化学试剂与培养基 | 第41-43页 |
| 3.2 实验方法与步骤 | 第43-53页 |
| 3.2.1 菌种的培养 | 第43页 |
| 3.2.2 原生质体的制备 | 第43-44页 |
| 3.2.3 打靶载体pPGT转化原生质体 | 第44页 |
| 3.2.4 米曲霉3.951与米曲霉RIB40形态特征及转化效率的比较 | 第44-45页 |
| 3.2.5 单核孢子的分离 | 第45页 |
| 3.2.6 目的缺失菌株的验证 | 第45-53页 |
| 3.3 结果 | 第53-63页 |
| 3.3.1 原生质体及细胞核荧光染色观察 | 第53-54页 |
| 3.3.2 米曲霉3.951与米曲霉RIB40的比较 | 第54-56页 |
| 3.3.4 表型验证 | 第56-58页 |
| 3.3.5 PCR验证 | 第58-60页 |
| 3.3.6 Shouthern杂交验证 | 第60-63页 |
| 3.4 讨论 | 第63-64页 |
| 3.4.1 营养缺陷型筛选缺失株 | 第63-64页 |
| 3.4.2 膜过滤法分离单核孢子 | 第64页 |
| 3.5 本章小结 | 第64-65页 |
| 第4章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 4.1 结论 | 第65-66页 |
| 4.2 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 个人简介 | 第77页 |
