| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-21页 |
| 1.1 基因治疗概述 | 第12-13页 |
| 1.2 聚阳离子非病毒载体 | 第13页 |
| 1.2.1 常见的阳离子聚合物基因载体 | 第13页 |
| 1.3 聚乙烯亚胺 | 第13-17页 |
| 1.3.1 高分子量PEI的改性研究 | 第14-15页 |
| 1.3.2 低分子量PEI的改性与研究 | 第15-17页 |
| 1.4 聚阳离子作为基因载体的障碍 | 第17-19页 |
| 1.4.1 细胞摄取途径 | 第17-18页 |
| 1.4.2 内涵体逃逸 | 第18页 |
| 1.4.3 目的基因的表达 | 第18-19页 |
| 1.5 选题思路、研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 酶解大豆分离蛋白 | 第21-30页 |
| 2.1 引言 | 第21-22页 |
| 2.2 实验试剂和仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第22页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-25页 |
| 2.3.1 酶解大豆分离蛋白最优条件的探究 | 第23-24页 |
| 2.3.1.1 对预处理时间的探究 | 第23页 |
| 2.3.1.2 大豆分离蛋白浓度的探究 | 第23-24页 |
| 2.3.1.3 酶浓度的探究 | 第24页 |
| 2.3.1.4 酶解时间的探究 | 第24页 |
| 2.3.1.5 酶解最优条件 | 第24页 |
| 2.3.2 酶解后大豆蛋白的制备 | 第24页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE分析 | 第24-25页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第25-29页 |
| 2.4.1 预处理时间测定 | 第25页 |
| 2.4.2 大豆分离蛋白浓度测定 | 第25-26页 |
| 2.4.3 酶浓度测定 | 第26-27页 |
| 2.4.4 酶解时间测定 | 第27-28页 |
| 2.4.5 酶解最优条件测定 | 第28页 |
| 2.4.6 大豆蛋白的纯化和分子量的测定 | 第28-29页 |
| 2.5 本章小结 | 第29-30页 |
| 第三章 聚合物SP-PEIs的制备及表征 | 第30-41页 |
| 3.1 引言 | 第30-31页 |
| 3.2 实验试剂和仪器 | 第31-32页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第31页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第31-32页 |
| 3.3 实验方法 | 第32页 |
| 3.3.1 聚合物SP-PEIs的制备 | 第32页 |
| 3.4 表征方法 | 第32-36页 |
| 3.4.1 聚合物SP-PEIs结构的表征 | 第32-33页 |
| 3.4.2 聚合物SP-PEIs的电位实验 | 第33页 |
| 3.4.3 聚合物SP-PEIs接枝效率的测定 | 第33页 |
| 3.4.4 聚合物SP-PEIs伯胺含量的测定 | 第33-34页 |
| 3.4.5 聚合物SP-PEIs酸碱滴定实验 | 第34-35页 |
| 3.4.6 聚合物SP-PEIs的蛋白吸附实验 | 第35-36页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第36-40页 |
| 3.5.1 聚合物SP-PEIs的FT-IR分析 | 第36-37页 |
| 3.5.2 聚合物SP-PEIs的电位检测 | 第37-38页 |
| 3.5.3 聚合物SP-PEIs接枝效率的测定 | 第38页 |
| 3.5.4 聚合物SP-PEIs质子缓冲能力的测定 | 第38-39页 |
| 3.5.5 聚合物SP-PEIs蛋白吸附能力的测定 | 第39-40页 |
| 3.6 本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 复合物SP-PEIs/DNA的制备及表征 | 第41-52页 |
| 4.1 引言 | 第41页 |
| 4.2 实验试剂和仪器 | 第41-43页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第41-42页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第42-43页 |
| 4.3 实验方法 | 第43-46页 |
| 4.3.1 无内毒素质粒提取与纯化 | 第43页 |
| 4.3.1.1 大肠杆菌的培养 | 第43页 |
| 4.3.1.2 含pEGFP-N1质粒的抽取 | 第43页 |
| 4.3.2 无内毒素质粒的纯度及浓度测定 | 第43-44页 |
| 4.3.2.1 纯度检测 | 第43-44页 |
| 4.3.2.2 浓度检测 | 第44页 |
| 4.3.3 复合物SP-PEIs/DNA的制备 | 第44页 |
| 4.3.4 琼脂糖凝胶电泳阻滞实验 | 第44-45页 |
| 4.3.5 肝素置换实验 | 第45页 |
| 4.3.6 DNase I酶降解实验 | 第45-46页 |
| 4.3.7 复合物SP-PEIs/DNA的粒径以及Zeta电位测定 | 第46页 |
| 4.3.8 不同pH中复合物SP-PEIs/DNA的稳定性 | 第46页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第46-51页 |
| 4.4.1 凝胶电泳阻滞实验 | 第46-47页 |
| 4.4.2 肝素置换实验 | 第47-48页 |
| 4.4.3 DNase I酶降解实验 | 第48-49页 |
| 4.4.4 复合物SP-PEIs/DNA的粒径和Zeta电位 | 第49-50页 |
| 4.4.5 不同pH中复合物SP-PEIs/DNA的稳定性 | 第50-51页 |
| 4.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第五章 聚合物SP-PEIs的细胞毒性评价及其介导的体外基因转染研究 | 第52-66页 |
| 5.1 引言 | 第52页 |
| 5.2 实验试剂和仪器 | 第52-54页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第52-53页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第53-54页 |
| 5.3 实验方法 | 第54-57页 |
| 5.3.1 细胞培养 | 第54-55页 |
| 5.3.2 细胞毒性实验 | 第55-56页 |
| 5.3.3 聚合物SP-PEIs介导293T和SH-SY5Y细胞的体外转染实验 | 第56-57页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第57-65页 |
| 5.4.1 聚合物SP-PEIs的细胞毒性 | 第57-58页 |
| 5.4.2 聚合物SP-PEIs介导293T和SH-SY5Y细胞的基因转染 | 第58-65页 |
| 5.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第79页 |
