| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第8-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-30页 |
| 1.1 概述 | 第13-19页 |
| 1.1.1 HS的结构及其与蛋白质的相互作用 | 第13-14页 |
| 1.1.2 HS生物合成途径 | 第14-16页 |
| 1.1.3 HS在干细胞生物学中的作用 | 第16-17页 |
| 1.1.4 HS在肿瘤发生发展中的作用 | 第17-18页 |
| 1.1.5 HS的人工合成 | 第18-19页 |
| 1.2 国内外研究进展概述 | 第19-28页 |
| 1.2.1 HS与干细胞分化和个体发育 | 第19-25页 |
| 1.2.2 HS与癌症发生发展国内外研究概述 | 第25-27页 |
| 1.2.3 天然和人工合成HS类似物在干细胞、再生医学领域的应用 | 第27-28页 |
| 1.3 本论文的主要研究内容 | 第28-30页 |
| 1.3.1 立题依据和研究意义 | 第28-29页 |
| 1.3.2 本文的工作主要研究内容 | 第29-30页 |
| 第二章 HS硫酸基转移酶与干细胞成骨分化潜力的相关性 | 第30-47页 |
| 2.1 引言 | 第30-31页 |
| 2.2 材料和方法 | 第31-37页 |
| 2.2.1 试剂和仪器 | 第31-32页 |
| 2.2.2 大鼠骨髓间充质干细胞的分离和表征 | 第32-33页 |
| 2.2.3 成骨分化和碱性磷酸酶（ALP）酶活测定 | 第33页 |
| 2.2.4 骨髓间充质干细胞成骨分化前后HS硫酸基转移酶mRNA的表达 | 第33-35页 |
| 2.2.5 细胞裂解和免疫印迹 | 第35-36页 |
| 2.2.6 HS6ST3 表达瞬时敲减的骨髓间充质干细胞细胞株建立 | 第36-37页 |
| 2.2.7 HS6ST3 敲减之后细胞生长和成骨能力的变化 | 第37页 |
| 2.2.8 数据分析 | 第37页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第37-45页 |
| 2.3.1 大鼠骨髓间充质干细胞的纯化 | 第37页 |
| 2.3.2 干细胞成骨分化模型的建立 | 第37-40页 |
| 2.3.3 HS硫酸基转移酶在大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化前后mRNA表达 水平的变化 | 第40-43页 |
| 2.3.4 成骨分化与特定的硫酸基转移酶表达的相关性 | 第43-45页 |
| 2.4 本章小结 | 第45-47页 |
| 第三章 HS硫酸基转移酶与两种肿瘤细胞株恶性表型的相关性 | 第47-61页 |
| 3.1 引言 | 第47-48页 |
| 3.2 材料和方法 | 第48-52页 |
| 3.2.1 试剂与仪器 | 第48-49页 |
| 3.2.2 细胞培养，药物处理和形态观察 | 第49页 |
| 3.2.3 ATRA对SKM-1 细胞的细胞周期的影响 | 第49-50页 |
| 3.2.4 ATRA对SKM-1 细胞增殖活力的影响 | 第50页 |
| 3.2.5 HS硫酸基转移酶mRNA的表达 | 第50页 |
| 3.2.6 HS硫酸基转移酶蛋白质的表达 | 第50页 |
| 3.2.7 HS3ST3A稳定干扰下调表达A549 细胞株的建立 | 第50-52页 |
| 3.2.8 细胞增殖和体外Matrigel基质胶侵袭实验 | 第52页 |
| 3.2.9 数据分析 | 第52页 |
| 3.3 结果和讨论 | 第52-60页 |
| 3.3.1 ATRA诱导SKM-1 细胞的粒细胞系分化 | 第52页 |
| 3.3.2 TGF-b1 诱导A549 非小细胞肺癌上皮—间充质转化 | 第52-53页 |
| 3.3.3 SKM-1 细胞粒细胞系分化和A549 细胞上皮—间充质转化过程中HS硫酸基转移酶的mRNA表达 | 第53-55页 |
| 3.3.4 SKM-1 细胞粒细胞系分化和A549 细胞上皮—间充质转化过程中HS硫酸基转移酶的蛋白表达 | 第55-57页 |
| 3.3.5 稳定HS3ST3A敲减的A549 细胞株的构建 | 第57-58页 |
| 3.3.6 HS3ST3A敲减对A549 细胞增殖和体外侵袭能力的影响 | 第58-60页 |
| 3.4 本章小结 | 第60-61页 |
| 第四章 HS多糖对干细胞分化的作用 | 第61-86页 |
| 4.1 引言 | 第61-63页 |
| 4.2 材料与方法 | 第63-70页 |
| 4.2.1 菌株、载体、试剂与仪器 | 第63-64页 |
| 4.2.2 K5 多糖（Heparosan）的发酵、纯化和表征 | 第64-65页 |
| 4.2.3 硫酸化K5 多糖—HS类似多糖的合成和表征 | 第65页 |
| 4.2.4 细胞培养和MTT实验 | 第65页 |
| 4.2.5 促成骨、软骨细胞分化活性测定 | 第65-66页 |
| 4.2.6 RT-PCR分析软骨相关基因的表达 | 第66页 |
| 4.2.7 重组pET-30a-Hep I、pET-30a(+)-SUMO-Hep I表达质粒的构建 | 第66-67页 |
| 4.2.8 6×His-Hep I、Hep I-6×His和SUMO-Hep I-6×His的表达和纯化 | 第67-68页 |
| 4.2.9 6×His-Hep I、Hep I-6×His和SUMO-Hep I-6×His最适温度和最适pH 的表征 | 第68页 |
| 4.2.10 6×His-Hep I、Hep I-6×His 和 SUMO-Hep I-6×His 酶催化的动力学参数 | 第68页 |
| 4.2.11 6×His-Hep I、Hep I-6×His 和 SUMO-Hep I-6×His 稳定性测定 | 第68-69页 |
| 4.2.12 细胞培养用Hep I-6×His的进一步纯化 | 第69页 |
| 4.2.13 Hep I-6×His处理对大鼠骨髓间充质干细胞生长影响 | 第69页 |
| 4.2.14 Hep I-6×His处理对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 | 第69页 |
| 4.2.15 数据分析 | 第69-70页 |
| 4.3 结果和讨论 | 第70-85页 |
| 4.3.1 K5 多糖的制备 | 第70页 |
| 4.3.2 硫酸化K5 多糖衍生物的合成和表征 | 第70-72页 |
| 4.3.3 K5 多糖及其硫酸化衍生物对于大鼠骨髓间充质干细胞的生物相容性 | 第72-74页 |
| 4.3.4 K5 多糖硫酸化衍生物对干细胞成骨、软骨方向分化的影响 | 第74-77页 |
| 4.3.5 6×His-Hep I、Hep I-6×His和SUMO-Hep I-6×His的表达和纯化 | 第77-78页 |
| 4.3.6 SUMO-HepI-6×His与 6×His-Hep I和Hep I-6×His可溶性表达、比酶活的比较 | 第78-79页 |
| 4.3.7 6×His-Hep I、Hep I-6×His和SUMO-Hep I-6×His最适pH和最适温度 | 第79-80页 |
| 4.3.8 6×His-Hep I、Hep I-6×His和SUMO-Hep I-6×His酶催化的动力学参数 | 第80-81页 |
| 4.3.9 6×His-Hep I、Hep I-6×His和SUMO-Hep I-6×His稳定性比较 | 第81-82页 |
| 4.3.10 Hep I-6×His处理对大鼠骨髓间充值干细胞生长影响 | 第82-84页 |
| 4.3.11 Hep I-6×His处理对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 | 第84-85页 |
| 4.4 本章小结 | 第85-86页 |
| 主要结论与展望 | 第86-88页 |
| 主要结论 | 第86-87页 |
| 展望 | 第87-88页 |
| 论文主要创新点 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-104页 |
| 附录 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第104页 |
