| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 英文缩写词表 | 第17-18页 |
| 第1章 绪论 | 第18-26页 |
| 1.1 烟曲霉及烟曲霉病的研究进展 | 第18-21页 |
| 1.1.1 烟曲霉及烟曲霉病 | 第18-19页 |
| 1.1.2 烟曲霉致病机制研究进展 | 第19-20页 |
| 1.1.3 形态改变对烟曲霉致病力的影响 | 第20-21页 |
| 1.2 反向遗传学研究方法 | 第21-22页 |
| 1.2.1 插入突变技术概述 | 第21页 |
| 1.2.2 主要的丝状真菌反向遗传学研究方法 | 第21-22页 |
| 1.3 常用的插入位点分析方法 | 第22-24页 |
| 1.3.1 反向PCR | 第22-23页 |
| 1.3.2 热不对称PCR | 第23页 |
| 1.3.3 高效热不对称PCR | 第23页 |
| 1.3.4 接头PCR | 第23页 |
| 1.3.5 本研究涉及的其他PCR方法 | 第23-24页 |
| 1.4 几丁质合酶研究进展 | 第24页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第2章 烟曲霉形态改变突变体的筛选 | 第26-36页 |
| 2.1 材料 | 第26-29页 |
| 2.1.1 菌株 | 第26页 |
| 2.1.2 所用培养基及试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 引物 | 第27页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第27-29页 |
| 2.2 方法 | 第29-31页 |
| 2.2.1 烟曲霉突变体菌株的活化 | 第29页 |
| 2.2.2 PCR检测T-DNA插入突变体 | 第29-30页 |
| 2.2.3 形态改变烟曲霉突变体的筛选 | 第30-31页 |
| 2.3 结果 | 第31-35页 |
| 2.3.1 烟曲霉突变体菌株的活化 | 第31页 |
| 2.3.2 PCR检测T-DNA插入突变体 | 第31-32页 |
| 2.3.3 形态改变烟曲霉突变体的筛选 | 第32-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35页 |
| 2.5 本章小结 | 第35-36页 |
| 第3章 高通量插入突变体库插入位点分析方法的建立 | 第36-58页 |
| 3.1 材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 菌株 | 第36页 |
| 3.1.2 培养基 | 第36页 |
| 3.1.3 试剂 | 第36页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-44页 |
| 3.2.1 质粒pBHT1的提取 | 第37页 |
| 3.2.2 TAIL-PCR法和HI-TAIL法扩增质粒pBHT1 T-DNA侧翼序列 | 第37-41页 |
| 3.2.3 利用降落PCR方法对HI-TAIL PCR进行改进 | 第41-42页 |
| 3.2.4 产物的T-A克隆 | 第42-43页 |
| 3.2.5 侧翼序列测序 | 第43页 |
| 3.2.6 试验方法的简化 | 第43页 |
| 3.2.7 烟曲霉突变体基因组最佳提取方案的选择 | 第43-44页 |
| 3.2.8 烟曲霉突变体基因组侧翼序列分析 | 第44页 |
| 3.3 结果 | 第44-54页 |
| 3.3.1 质粒pBHT1的提取 | 第44-45页 |
| 3.3.2 TAIL-PCR法和HI-TAIL法扩增质粒pBHT1 T-DNA侧翼序列 | 第45-47页 |
| 3.3.3 利用降落PCR方法对HI-TAIL PCR进行改进 | 第47-48页 |
| 3.3.4 产物的T-A克隆 | 第48页 |
| 3.3.5 侧翼序列测序 | 第48页 |
| 3.3.6 试验方法的简化 | 第48-49页 |
| 3.3.7 烟曲霉突变体基因组最佳提取方案的选择 | 第49-52页 |
| 3.3.8 烟曲霉突变体基因组侧翼序列分析 | 第52-54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-57页 |
| 3.4.1 利用降落PCR代替HI-TAIL PCR中的热不对称PCR技术 | 第54-55页 |
| 3.4.2 模板的完整性是反应成败的关键 | 第55页 |
| 3.4.3 反应程序的简化 | 第55-57页 |
| 3.5 本章小结 | 第57-58页 |
| 第4章 烟曲霉白化突变株AFM1006基因功能研究 | 第58-80页 |
| 4.1 材料 | 第58-60页 |
| 4.1.1 菌株 | 第58页 |
| 4.1.2 试剂 | 第58-59页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第59-60页 |
| 4.2 方法 | 第60-66页 |
| 4.2.1 突变株AFM1006插入位点分析 | 第60-61页 |
| 4.2.2 AFM1006影响基因的验证 | 第61-62页 |
| 4.2.3 AFM1006打断基因的结构域分析 | 第62-63页 |
| 4.2.4 AFM1006菌株形态及生长发育的宏观、微观形态观察 | 第63页 |
| 4.2.5 AFM1006菌株生理生化水平的改变 | 第63-65页 |
| 4.2.6 AFM1006打断基因的翻译后修饰预测 | 第65页 |
| 4.2.7 AFM1006回复突变株的构建 | 第65-66页 |
| 4.3 结果 | 第66-77页 |
| 4.3.1 突变株AFM1006插入位点分析 | 第66-69页 |
| 4.3.2 AFM1006影响基因的验证 | 第69页 |
| 4.3.3 AFM1006打断基因的结构域分析 | 第69-70页 |
| 4.3.4 AFM1006菌株形态及生长发育的宏观、微观形态观察 | 第70-74页 |
| 4.3.5 AFM1006菌株生理生化水平的改变 | 第74页 |
| 4.3.6 AFM1006打断基因的翻译后修饰预测 | 第74页 |
| 4.3.7 AFM1006回复突变株的构建 | 第74-77页 |
| 4.4 讨论 | 第77-78页 |
| 4.4.1 烟曲霉csmB基因影响分生孢子梗的分化 | 第77页 |
| 4.4.2 烟曲霉csmB基因可能仅在顶囊表面表达并发挥作用 | 第77-78页 |
| 4.4.3 展望 | 第78页 |
| 4.5 本章小结 | 第78-80页 |
| 第5章 结论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第88-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
